A gonococcus izolálására szolgáló táptalaj száraz. Gonococcusok szaporodásához szükséges táptalajok. Mielőtt a tanulmány, hogy egy kerítés

Ár kérésre

A mennyiség megadásával egy terméket a kosárba helyezhet

Gyártó: Pasteurről elnevezett FBUN Epidemiológiai és Mikrobiológiai Kutatóintézet

Ország Oroszország

Mértékegység egység: készlet

Csomagolás típusa: kartondoboz

Kereskedői kód:

Leírás

Reagenskészlet a gonococcusok kulturális módszerrel történő izolálására az urogenitális rendszer gyulladásos betegségeiben szenvedő betegek klinikai anyagának tanulmányozásában. 110 ml szilárd táptalaj elkészítésére tervezték, használatra kész

Funkcionális cél

A GHS kit komponensei optimális feltételeket biztosítanak a Neisseria gonorrhoeae növekedéséhez a látható telepek kialakításához szükséges mennyiségben, a szelektív adalékanyag pedig gátolja a mintában potenciálisan előforduló protozoák, gombák és a legtöbb kapcsolódó flóra növekedését.
A módszertan több szakaszból áll, amelyek mindegyikét bizonyos követelményeknek megfelelően kell végrehajtani. A betegség diagnosztizálásának minden szakaszának befejezése után a kórokozó gonokokkusz táptalajon történő tenyésztésének módszerével 18-24 óra, 48 és 72 óra elteltével vizuálisan rögzítjük az eredményeket. A gonococcusokra jellemző világosszürke, enyhén zavaros kerek telepek láthatók. Akut gonorrhoea esetén a gonococcus növekedése az első napon, krónikus gonorrhoeában - akár 72 óráig is megfigyelhető. Az eredményt negatívnak tekintjük, ha 7 napos inkubáció után nincs növekedés.

Műszaki adatok

Állítsa be a kompozíciót
1. A táptalaj alapja, száraz - 4,1 g x 1 palack;
agar, élesztőkivonat, pepton, keményítő, sók;
Megjelenés: világossárga, higroszkópos por;
2. Szelektív adalékanyag, liofilizált - 1 fiola;
koenzimek, eritrocita lizátum, gombaellenes szerek, antibiotikumok, cukor;
Megjelenés: rózsaszínes-bézs liofilizátum.
Az elkészített táptalaj tiszta, világossárga színű, enyhe opálos, enyhe üledék megengedett.
pH 7,2-7,4
Kiadási forma: kartondobozban, használati utasítással együtt.
Tárolási feltételek: +2...8°C hőmérsékleten legfeljebb 12 hónapig, legfeljebb +25°C hőmérsékleten legfeljebb 2 hétig elfogadható.
A kész táptalaj kémcsövekben vagy Petri-csészékben legfeljebb 7 napig tárolható.
Regisztrálva Roszdravnadzorban

A "Tápközeg a gonococcus száraz izolálására" (GNK agar) reagenskészlet mikrobiológiai célokra szolgál. Gonococcus izolálására használják a fertőzött anyagok tanulmányozása során, valamint táptalajként a gonococcusok tenyésztésére és tárolására a kutatómunkában.
A reagenskészlet két liofilizált komponensből álló készletként kapható:

a táptalaj alapjai - liofilizált 100 ml térfogatú palackban - 1 db;
adalék a tápközeg alapjához - liofilizátum 24 ml-es palackban - 1 db

Összetevők: a táptalaj alapja nyúlhús kivonat, bakteriológiai célra száraz enzimes pepton, nátrium-klorid, sütőélesztő autolizátum, orotsav, mikrobiológiai agar. Adalék a tápközeg alapjához - folyékony lószérum normál bakteriológiai tápközeghez, sütőélesztő autolizátum, aminopeptid mikrobiológiai tápközeghez.

Elkészítés: 100 ml steril tisztított vizet a tápközeg alapjával ellátott palackba töltünk és (30 ± 5) percig tartjuk, majd forrásban lévő vízfürdőbe helyezzük, amíg az agar teljesen fel nem olvad, az agar felolvadása után, legfeljebb 5 percig vízfürdőben tartjuk. Töltsön a palackba 24 ml steril tisztított vizet a tápközeg hozzáadásával, és tartsa (20±2) percig a teljes feloldódásig 20-25°C hőmérsékleten. Az oldott adalékanyagot feloldva a bázisra visszük, és (50 ± 2) °C-ra hűtjük. A táptalajt megkeverjük, 3 ml-es steril kémcsövekbe öntjük és ferdén 0,5 ml steril 0,9%-os nátrium-klorid-oldatot adunk hozzá. minden kémcsőbe, hogy megnedvesítse a táptalajt. A táptalaj 10-15 ml-es adagokban steril Petri-csészékbe is adagolható. A tápközeggel ellátott kémcsöveket vagy csészéket (24±1) órára termosztátba helyezzük (37±1)°C hőmérsékleten a sterilitás ellenőrzése érdekében. Az elkészített táptalajt (6±2)°C hőmérsékleten legfeljebb 7 napig tároljuk.

Működési elv: a reagenskészletnek biztosítania kell a Neisseria gonorrhoeae "Loshakov" és a Neisseria gonorrhoeae "Denisov" teszttörzsek növekedését 0,5 ml 10"5 hígítású mikrobaszuszpenzióval oltva 24-48 órás inkubáció után. (37 ± 1) ° C hőmérsékleten átlátszó vagy áttetsző színtelen telepek formájában, amelyek mérete 0,5-2 mm, sima szélekkel.

Elemzés: figyelembe véve a vetés eredményeit, 24, 48 és 72 órás inkubáció után végezzük (37 ± 1) ° C hőmérsékleten. A gonorrhoeás betegek húgyúti szerveinek vetésénél a gonococcus növekedése táptalajon 24-72 órán belül kell lennie. Gonococcus növekedésének hiányában a tenyészeteket legfeljebb 7 napig termosztátban kell tartani.

Kiszerelés: 0,25 kg-os műanyag tégelyek 3,6 l táptalaj elkészítéséhez.

Lejárati idő - 1 év.

Az ár 1 kg-ra vonatkozik, ÁFA-val együtt.

A gonokokok bab alakúak, diplococcusok formájában vannak elrendezve, mikrokapszulával körülvéve, nem rendelkeznek flagellákkal, nem képeznek spórákat, hasonlóan a meningococcusokhoz. A sejtfalnak van egy külső membránja, melynek fehérjéi három csoportra oszthatók aszerint funkcionális érték. A gonokokkokra jellemző a pili jelenléte, amelyek antigén tulajdonságaikban különböznek egymástól (16 antigén változat). A gonokokkokat natív fehérjét (vérszérum, ascitikus folyadék) tartalmazó táptalajokon tenyésztik. Jobban nő 3-5% CO2-nál. Az ascitagaron átlátszó, sima szélű telepeket képeznek. A szénhidrátokból csak a glükóz fermentálódik, kataláz és citokróm-oxidáz képződik - a Neisseriára jellemző enzimek. Antigének A gonococcusok antigénszerkezete változó. Ennek oka a pili számos antigénváltozatának jelenléte, amelyek a fertőzés kialakulása során képződnek. Patogenitás és patogenezis A gonokokok a húgycső hengeres hámjához, a méhnyak hüvelyi részéhez, a végbélhez, a szem kötőhártyájához, valamint a spermiumokhoz és protozoákhoz (Trichomonas, amőba) kötődnek. Az adhézió a sejtfal külső membránjának pilusai és fehérjéi miatt következik be. jellemző tulajdonság A gonococcusok azon képessége, hogy behatolnak a leukocitákba és szaporodnak bennük. A sejtfal lipooligoszacharid része mérgező hatású. A kapszuláris poliszacharidok gátolják a fagocitózist. A húgycső nyálkahártyájának hengeres hámjának villijához, valamint a nőkben és az endocervikális csatornához kapcsolódva a gonokokkok behatolnak a sejtekbe a sejtfal külső membránjának fehérjéinek részvételével. Ez akut urethritis, cervicitis és elváltozások kialakulásához vezet a nőknél a méhnyak, a függelékek (csövek, petefészek), a férfiaknál az ondóhólyagok és a prosztata mirigyében. Extragenitális lokalizáció esetén a gonokokkok károsíthatják a végbelet és a mandulákat, és újszülötteknél is okozhatnak blennorrhoeát (kötőhártya-gyulladást). A fertőzés a gonorrhoeás anya születési csatornáján való áthaladás során következik be. Immunitás A gonorrhoeának humorális immunválasza van. A keletkező antibakteriális antitestek azonban nem rendelkeznek védő tulajdonságokkal. A betegség lefolyása során IgA képződik, amely elnyomja a kórokozó pilusok kötődését a húgycső nyálkahártyájának sejtjeihez. Nem képesek azonban megvédeni a nyálkahártyát a gonokokk más generációi által okozott későbbi fertőzéstől, ami az antigénszerkezetük megváltozásával jár. Ez újrafertőződéshez és visszaeséshez, valamint a betegség krónikus formába való átmenetéhez vezet. Gonococcus fertőzések A gonorrhoea és a blennorrhoea kórokozója az N.gonorrhoeae (előzetesen gonococcusnak minősítve) a Neisseriaceae családba, a Neisseria nemzetségbe tartozik. A betegek váladékából származó kenetekben a gonococcusok kávébab alakúak, gram-negatívak, párokba rendeződnek mind a leukocitákon belül (tökéletlen fagocitózis), mind a sejteken kívül. Morfológiai jellemzőik szerint nagyon hasonlítanak a meningococcusokhoz. A gonococcusokra jellemző a polimorfizmus - vannak kicsi és nagy sejtek, ritkán rúd alakúak, nagyon szeszélyesek a tápközeggel szemben. Növekszik jobban vért, szérumot, ascitic folyadékot tartalmazó táptalajon. A gonococcusok fehérje és poliszacharid antigéneket tartalmaznak, ezek szerint 16 szerovariánsra oszthatók, de a rutin bakteriológiai laboratóriumokban még nem határozták meg.A gonokokk fertőzések mikrobiológiai diagnosztikájára bakterioszkópos, bakteriológiai, szerológiai és allergiás módszereket alkalmaznak. Anyagfelvétel kutatáshoz A bakteriológiai és bakterioszkópos diagnosztika megfelelő és jóindulatú elvégzéséhez fontos a klinikai anyag helyes felvétele. Általában orvosnak kell elvégeznie.Férfiaknál megvizsgálják a húgycső, a paraurethralis járatok, a végbél váladékozását, adott esetben az oropharynx anyagát, valamint a masszírozása után a prosztata mirigy titkát. Meg lehet vizsgálni a vizelet üledékét és "szálait" is, de gonokokkokat sokkal ritkábban mutatnak ki bennük. A húgycsőből való anyag felvétele előtt a beteg 4-5 órán keresztül nem vizelhet, ne használjon antimikrobiális gyógyszereket és fertőtlenítő oldatokat. A húgycső külső nyílását először 0,85%-os nátrium-klorid oldattal megnedvesített steril pamut törlővel, majd száraz törlőkendővel töröljük át. A keneteket nem trágyából készítik, az szabadon folyik, hanem a húgycső nyálkahártyájáról bakteriológiai hurokkal vagy speciális Volkmann kanállal lekapart anyagból. Kisebb váladékozás esetén a húgycső előzetes masszázsát kell végezni. Nőknél az anyagot a húgycsőből, a paraurethralis járatokból, a méhnyakból, a végbélből és a jelzések szerint az oropharynxből veszik. Először a hüvelyt megtisztítják a váladéktól, masszírozzák a húgycsövet, majd bakteriológiai hurokkal vagy Volkmann kanállal kaparással veszik az anyagot. A méhnyakot először steril pamut törlővel dörzsöljük, hogy eltávolítsuk a nyálkahártyát. A méhnyakcsatornából származó ürítés bakteriológiai hurokkal vagy csipesszel történik. A distalis végbélből az anyagot Volkmann kanállal vak módszerrel, azaz a beteg felkészítése nélkül, vagy reszkóp vagy rektális tükör segítségével veszik, ilyenkor a vizsgált anyagot közvetlenül a láthatóból veszik. Az elváltozás helye.Oropharyngealis gonorrhoea esetén az oropharynxből steril vattacsomóval levett nyálkát speciális acélhuzalból készült tartókon.A "lenorrhoea" diagnózisához a kötőhártyát bakteriológiai hurokkal távolítják el. A gonorrhoeát ritkán bonyolítja gonosepsis, endocarditis, ízületi gyulladás. Ezután a vér vagy az ízületi folyadék szolgál felhasználási anyagként. Figyelembe véve a gonococcusok magas - V hőmérséklet-ingadozásokkal szembeni ellenállását, a vizsgálati anyagokat speciális termoszokban vagy fűtőbetétes zacskókban szállítják a laboratóriumba. Bakterioszkópos vizsgálat A bakterioszkópos vizsgálat a legelterjedtebb, bár kevésbé érzékeny módszer a gonorrhoea és a blennorrhoea laboratóriumi diagnosztizálására a valódi tenyészetek izolálásához képest. Ez különösen igaz a betegség krónikus lefolyására, amikor a vizsgálati anyag kis mennyiségű gonococcust tartalmaz. A helyes mintavétellel, a betegek ismételt vizsgálatával, provokációs módszerek alkalmazásával, a kenetek minősített értékelésével azonban a bakterioszkópos vizsgálat gyakran lehetővé teszi a betegség gyors és helyes diagnosztizálását. vizsgálati anyag. Az egyiket metilénkékkel, a másodikat Gram-módszerrel festjük. Metilénkék hiányában egy kenet 1%-os festéssel festhető vizesoldat kristályibolya vagy 0,5%-os briliánzöld oldat 1 percig. A gonococcusok jelenlétére vonatkozó következtetést azok tulajdonságai alapján vonjuk le: gram-negatív szín, diplococcus szerkezet, kávébab alakja, leukocitákon belüli elhelyezkedése.Antibiotikumok és egyéb kemoterápiás gyógyszerek hatására, valamint krónikus gonorrhoea esetén a morfológia és a gonococcusok színe változhat. Az egyes sejtek eltérő formát és méretet vesznek fel (az úgynevezett Asha alakzatok). Ezenkívül a Veillonella nemzetségbe tartozó gonococcusokhoz hasonló Gram-negatív coccusok is megtalálhatók a vizsgálati anyagban. Ez bizonyos mértékig korlátozza az elsődleges mikroszkópos módszer diagnosztikai értékét, a legjobb és legmegbízhatóbb eredményeket az immunfluoreszcens módszer adja. A betegek váladékából származó vékony keneteket égő lángjában rögzítik. Fluoreszcein-izotiocianáttal jelölt antigonokokkusz szérummal fedjük be őket 1 órán át 35°C-on, nedves kamrában. Ezt követően a keneteket kétszer mossuk pufferelési megoldás, vigyen fel pufferolt glicerint és fedje le fedőlemezekkel. Amikor a gonococcusok fluoreszcens mikroszkóp alatt kölcsönhatásba lépnek a jelölt antitestekkel, jellegzetes izzás látható a baktériumsejtek körül. Bakteriológiai vizsgálat A gonococcusok tiszta tenyészeteinek izolálására utaló jelek a bakterioszkópia ismételt negatív eredményei, gyanús gonococcusok, de morfológiailag nem azonosított mikroorganizmusok jelenléte, valamint a betegség gyógyulásának megbízható megállapítása. Nagyon fontos, hogy a terményt azonnal a termosztátba helyezzük. Ha az anyag felvételének helyén nem lehet bevetést végezni, akkor vattacsomóval Stewart szállítóközeggel ellátott kémcsőbe akaszthatja, amely biztosítja a gonokokkok életképességének megőrzését a laboratóriumba szállítás során. a standard séma szerint a kémcsövekben vagy Petri-csészékben lévő speciális tápközegek egyikében (KDS, Bailey , vér- vagy szérum-agar, a "Biolek" harkovi vállalkozás száraz tápközege bakteriális és gyógyszerek). A gonococcusok diagnosztikai tenyésztéséhez sok országban "csokoládé" agart is használnak. A legjobbak a nyúlhúsból vagy friss szarvasmarhaszívekből agar alapú táptalajok. 20 egység/ml polimixin és 2 µg/ml linkomicin hozzáadása jelentősen megnöveli a gonococcusok kioltásának gyakoriságát, mivel ezek a gyógyszerek gátolják más baktériumok szaporodását. A vetés előtt minden táptalajt termosztátban melegítenek 15-20 percig. A tenyészeteket tartalmazó csészéket és csöveket exszikkátorokba helyezik, ahol 20% CO2-t tartalmazó atmoszférát hoznak létre. A telepek általában 18-24 óra alatt nőnek, de ez is lehetséges késői növekedés . Ezután a növényeket termosztátban (exszikkátorban!) 8 napig tartják, naponta ellenőrizve a növekedés megjelenését.A kinőtt gonokokkolóniák kerek, enyhén domború alakúak, sima szélűek, fényes felületűek, nyálkás állagúak . Átlátszóak, mint a harmatcseppek, szinte színtelenek, bár előfordulhatnak fehéres változatok is. A létrejövő telepeket makro- és mikroszkóppal vizsgáljuk. A kenetekben a gonococcusok párban, tetradokban és klaszterekben helyezkednek el. A reprezentatív telepeket ferde szérum-agarra szélesztjük, hogy tiszta tenyészetet izoláljunk. A végső azonosítás a morfológiai, tenyésztési, enzimatikus és antigén tulajdonságok figyelembevételével történik. Biokémiailag a gonococcusok nem túl aktívak. 1,5% különféle szénhidrátot tartalmazó szérum táptalajokon csak a glükózt bontják, de a maltózt és a szacharózt nem.Az izolált tenyészetek oxidázaktivitását úgy határozzuk meg, hogy a telepekre 1%-os dimetil-parafenilén-diamin oldatot juttatunk (mikroszkópos vizsgálat után). Az oxidáz-pozitív telepek először pirosra, majd feketére színeződnek.A gonococcusok megkülönböztetése a Neisseria nemzetség más fajaitól különösen fontos az oropharyngealis gonorrhoea diagnózisában. Mint tudják, a mandulák, oropharynx és nasopharynx nyálkahártyáján folyamatosan nagyszámú gram-negatív Neisseria található - a normál emberi mikroflóra képviselői. A gonococcusok azonosításának megbízható módszerei az immunfluoreszcencia-, latex- és koagglutinációs tesztek, valamint az enzimatikus tulajdonságok meghatározása. A mikroorganizmusok antibiotikumokkal szembeni érzékenységének vagy rezisztenciájának kvalitatív meghatározását agar diffúziós módszerrel, korongok segítségével mindenképpen végezzük el.A primer mikroszkópos vizsgálat során a kenetekben a gonokokkuszok megtalálásának gyakoriságának növelése és a tiszta tenyészetek megbízhatóbb izolálása, különösen a a betegség lomha, krónikus lefolyása, gonorrhoea provokációs módszerekhez folyamodnak. , vagyis a kóros folyamat mesterséges súlyosbításához, melynek következtében a váladékban nagyobb számban jelennek meg gonococcusok. A főbb módszerek a következők: a) kémiai - 0,5% -os ezüst-nitrát oldat becsepegtetése férfiaknál a húgycsőbe, a nyaki csatorna kenése 2-5% -os ezüst-nitrát oldattal; b) mechanikus - közvetlen húgycső bevezetése Bougie a húgycsőbe 10 percig, vagy elülső ureteroszkópia; c) biológiai - gonovaccine intramuszkuláris beadása 500 millió mikrobatest vagy pirogenális 200 MPD mennyiségben; d) táplálék - sós, fűszeres ételek fogyasztása; menstruáció. Még jobb, ha több provokációs módszert kombinálunk, például kémiai, táplálkozási és biológiai. Utóbbi időben a gonorrhoea kórokozójának megbízhatóbb kimutatása érdekében polimeráz láncreakciót végzünk. Lehetővé teszi a kórokozó azonosítását krónikus gonorrhoea esetén, amikor a bakterioszkópos és bakteriológiai vizsgálat nem ad pozitív eredményt. Szerológiai diagnosztika A gonorrhoea szerológiai diagnosztikáját viszonylag ritkán végezzük, főleg krónikus lefolyásában, amikor a bakterioszkópos és bakteriológiai vizsgálatok nem adnak pozitív eredményt. BAN BEN modern körülmények között ELISA, RNGA és Borde-Gangu reakciót (RSK) végeznek. E reakciók antigénjei a következők: hővel elölt polivalens gonokokkusz vakcina, ultrahanggal inaktivált vakcina, gonokokk fehérje- és poliszacharid frakciói, valamint piridin antigén. Az ELISA és az RNHA rendkívül specifikus és megbízható szerológiai tesztek. A múlthoz képest az RSK némileg elvesztette szerepét. Az akut gonorrhoea diagnosztizálásában nincs gyakorlati értéke, mivel még azelőtt kezelik, hogy jelentős mennyiségű antitest képződne. A kúra megbízhatóságának megállapítására általában alkalmatlan. A Bordet-Gangu reakció megtette fontosságát krónikus gonorrhoea szerodiagnózisában, különösen annak bonyolult formáiban (gonosepsis, metritis, ízületi gyulladás, prosztatagyulladás stb.) Az allergiás tesztek diagnosztikus értékét némileg leértékeli, hogy a gonorrhoea elszenvedése után sok évig pozitívak. Előállításukhoz 0,1 ml friss gonococcus vakcinát (100 millió mikrobiális sejt 1 ml-ben) adnak be intradermálisan. 24 óra elteltével hyperemia figyelhető meg, néha ödémával a központban. Kezelés és megelőzés A gonorrhoea kemoterápiájában antibiotikumokat alkalmaznak: béta-laktámokat (penicillinek, cefalosporinok) és egyéb antibiotikumokat. A gonorrhoea elleni vakcinázást hatékony vakcinák hiánya miatt nem végzik el. A blennorrhoea megelőzése érdekében minden újszülöttnek a felsorolt antibiotikumok valamelyikének oldatát csepegtetik a szem kötőhártyájára.

A Neisseria gonorrhoeae a Neisseriaceae család, a Neisseria nemzetség tagja. A gonokokkokat Neisser fedezte fel 1879-ben, és az egész családot róla nevezték el.

Morfológia. A gonokokok két bab alakú, egymáshoz homorú oldallal elhelyezkedő (kávébabra emlékeztető) coccusból álló diplococcusok. A gonococcusok mérete 1,2-1,3 × 0,7-0,8 µm. Polimorfak, a nagyok mellett nagyon kicsi, szabálytalan alakú L-alakú baktériumok találhatók. A gonococcusok mozdulatlanok, és nincsenek spóráik. A kóros anyagban (gennyben) kapszulaszerű anyag található. Gram-negatív. Gyógyászati és egyéb anyagok hatására gyorsan változnak: megjelennek a gram-pozitív formák. A kóros anyagban intracellulárisan (leukocitában) helyezkednek el, de lehetnek a sejten kívül is. Lehet egyedi coccusok formájában (lásd 4. ábra).

Termesztés. A gonococcusok aerobok. Nagyon igényes táptalajra. Natív (emberi) fehérjét - vért, szérumot - tartalmazó táptalajon nőnek 37 ° C hőmérsékleten és 7,2-7,4 pH-értéken. A tápközegnek frissen előkészítettnek és nedvesnek kell lennie. A vetést az anyag felvétele után azonnal el kell végezni. Szérum táptalajon a gonococcusok kis, 1-2 mm-es, átlátszó, fényes, harmatcseppekre emlékeztető telepeket képeznek. A vér táptalajon hemolízist nem végeznek. A tejsavólevesben enyhe zavarosodást és filmréteget adnak, amely a tubus aljára ülepedik. Gyenge növekedés esetén 24 óra elteltével a növényeket termosztátban hagyják a második napra.

enzimatikus tulajdonságok. A szacharolitikus tulajdonságok gyengén kifejeződnek. A gonococcusok csak egy cukrot - a glükózt - bontják le sav képződésével. Nem rendelkeznek proteolitikus tulajdonságokkal.

Toxin képződés. A gonococcusok sejtfalában mérgező anyag található - lipopoliszacharid (kevéssé vizsgálták).

Antigén szerkezet. Az antigén szerkezet heterogén és könnyen változik a környezeti tényezők hatására. Még nincs általánosan elfogadott felosztása a gonococcusoknak szerovariánsokra és szerotípusokra.

Tényezőkkel szembeni ellenálló képesség környezet. A külső környezetben a gonococcusok nem túl stabilak. 56-60 ° C hőmérsékleten elpusztulnak. 40 ° C-os hőmérsékleten életképességük élesen csökken. Alacsony hőmérsékletés a szárítás gyorsan tönkreteszi őket. De gennyben akár 24 óráig is megmaradnak Fertőtlenítő oldatok - 1%-os fenolos oldat, 1:1000 szublimátum pár percen belül elpusztítja a gonokokkokat. A gonococcusok különösen érzékenyek az ezüstsókra – az ezüst-nitrát 1%-os oldata azonnal elpusztítja őket. Az UV-sugarak perceken belül megölik őket.

Az állatok fogékonysága. Az állatok nem érzékenyek a gonococcusra. A gonokokkusz toxin intraperitoneális beadása fehér egereknek azonban halálukat okozza.

A fertőzés forrásai. Gonorrhoeás személy.

átviteli utak. Kontakt-háztartás (szexuális), ritkábban szennyezett tárgyakon keresztül (törülköző, szivacs stb.).

Betegségek emberben. Gonorrhoea és blenorrhoea.

Patogenezis. A gonococcusok természetes gazdája beteg ember. A gonococcusok áthatolnak a húgycső nyálkahártyáján (nőknél - a húgycső és a méhnyak). A gonococcusok patogenitási tényezője a bennük lévő pilik jelenléte, amelyek a hengeres hám mikrobolyhjaihoz kapcsolódva hozzájárulnak a gonococcus behatolásához a hámsejtbe, akut gyulladásos folyamatot okozva a nyálkahártyában.

Klinikailag a gonorrhoea vizelés közbeni fájdalomban, a húgycsőből és a hüvelyből kilépő gennyben nyilvánul meg. A betegség akut, de néha krónikussá válik. A gonococcusok gonorrhoeás kötőhártya-gyulladást - blennorrhoeát (újszülötteknél a szem nyálkahártyájának gennyes gyulladása) okozhatnak. A gonococcusok ritkán terjednek át a húgycsőből más szervekbe, de néha ízületi gyulladást, endocarditist stb.

Immunitás. A gonococcusokkal szemben nincs természetes rezisztencia. Az átvitt betegség szintén nem hoz létre immunitást. A megfigyelt fagocitózis nem teljes.

Megelőzés. Egészségnevelés. Kulturális és higiéniai színvonal emelése. Nincs konkrét megelőzés. A blennorrhoea megelőzése érdekében a gyermekeknek közvetlenül a születés után 1-2 csepp 30% -os albucid oldatot kell beadni a kötőhártyazsákba.

Kezelés . Antibiotikumok (penicillin, bicillin, sztreptomicin stb.). Szulfa gyógyszereket is használnak. Krónikus formában gonococcus elleni vakcinát alkalmaznak.

Ellenőrző kérdések

1. Ismertesse a gonococcusok morfológiai tulajdonságait!

2. Mi a gonococcusok enzimaktivitása és toxinképződése?

3. Milyen a gonococcusok rezisztenciája? Milyen gyógyszerre különösen érzékenyek a gonococcusok?

4. Milyen betegségeket okoznak a gonococcusok és azok kórfejlődése.

Mikrobiológiai kutatás

A vizsgálat célja: gonococcusok és gonokokkusz elleni antitestek kimutatása.

Kutatási anyag

1. A húgycső leválasztható nyálkahártyája férfiaknál.

2. A húgycső és a méhnyak nyálkahártyájának váladékozása nőknél.

3. Gennyes váladékozás a szemből.

4. Vér a szérum beszerzéséhez.

Jegyzet. Bakterioszkópos és bakteriológiai kutatás az anyag felvétele: 1) az antibiotikumos kezelés megkezdése előtt: 2) legkorábban az antibiotikumos kezelés befejezése után 10 nappal; 3) legkorábban 2 órával az utolsó vizelés után; 4) legkorábban 2 órával az öblítés után.

Alapvető kutatási módszerek

1. Mikroszkópos (főleg akut formákban használják).

2. Mikrobiológiai.

3. Szerológiai.

A kutatás előrehaladása

A kutatás második napja

Vegye ki a terményt a termosztátból, és nézze meg őket. A kolóniák tanulmányozása. Keneteket készítenek. Gyanús gram-negatív diplococcusok jelenlétében a telepeket ferde táptalajon kémcsövekben továbbtenyésztjük (a táptalajnak frissen kell készülnie és elegendő mennyiségű kondenzátumot kell tartalmaznia), és mintát veszünk az oxidáz vizsgálatára. Ehhez pipettával csepp 1%-os dimetil-parafenilén-diamin oldatot csepegtetünk a telepre, a telepek színe sötétbarnáról feketére változik.

A kutatás harmadik napja

A tenyészeteket kivesszük a termosztátból, a ferde agarról mintát veszünk, Grammel megfestjük és mikroszkóppal. Hiss táptalajra oltva (laktóz, glükóz, mannit és maltóz). Ezeknek a szénhidrátoknak a vérszérum 30%-át kell tartalmazniuk. Az oltott csöveket termosztátba helyezzük.

A kutatás negyedik napja

Vegye ki a kémcsöveket a termosztátból, növekedés hiányában hagyja még 1-2 napig a termosztátban. Növekedés esetén az eredményeket figyelembe vesszük (28. táblázat).

Szerológiai diagnózis

a betegség harmadik hete. A betegség krónikus lefolyása esetén és kétes esetekben az RSK-t a beteg szérumával együtt helyezik el (lásd 12. fejezet). Antigénként ipari körülmények között előállított, elölt gonococcus-tenyészetet használnak. Alkalmazhatja az indirekt hemagglutináció reakcióját (lásd a 12. fejezetet).

Ellenőrző kérdések

1. Milyen anyagot használnak a gonococcusok kimutatására és hogyan nyerik?

2. A vizeletürítés (vagy nőknél öblítés) után mennyi idővel vihető az anyag kutatásra?

3. Melyik a fő kutatási módszer az akut gonorrhoea és milyen a krónikus gonorrhoea esetén?

4. Mikor és milyen szerológiai reakciót adnak gonorrhoea gyanúja esetén?

5. Milyen mikroorganizmusoktól szükséges megkülönböztetni a gonococcusokat?

Szerezd meg a drogot a tanártól. Vizsgálja meg, és rajzolja meg a leukocitákon belül és kívül található gonokokcikat egy Gram-festésre.

Tápláló táptalajok

Sárgája környezet. 100 ml nyúlhúsból származó MPA-hoz adjunk 15 ml sárgáját (friss tyúk tojás), 6 ml fenolvörös indikátor, 1,5 ml cukor 1 ml steril desztillált vízben oldva.

Tápláló tápközeg ascites-agar. A nyúlhúsból készült húsleves szűrletéhez 2% agart, 1% peptont és 0,5% nátrium-kloridot adunk. Melegítsük, amíg az agar fel nem oldódik, állítsuk a pH-t 7,4-7,5-re, lúgosítsuk 20%-os nátrium-hidroxiddal. A táptalajt felforraljuk, szűrjük, steril fiolákba öntjük és autoklávban 15 percig 115 °C-on sterilizáljuk.

Aszcitikus tápközeg (MPA pH 7,4-7,5) receptjei.

1) húsvíz nyúlhúsból vagy bikaszívből - 100 ml

kazein-hidrolizátum - 2 ml

élesztő autolizátum - 2 ml

nagy vérszérum marha- 20 ml

2) nyúlhúsból vagy bikaszívből származó húsvíz - 100 ml

5% -os hemohidrolizátum oldat - 2 ml

élesztő autolizátum - 2 ml

szarvasmarha szérum - 20 ml

3) nyúlhúsból vagy bikaszívből származó húsvíz - 100 ml

csirke tojássárgája - 10 ml

szarvasmarha vérszérum - 20 ml

A gonococcusok szaporodása ezeken a táptalajokon bőséges. A gonococcus telepeket oxidáz teszttel lehet kimutatni, amely vörösből feketébe változik.

Felhasználás: mikrobiológia, gonorrhoea diagnosztika, táptalaj gonococcus izolálására és tenyésztésére. A találmány lényege: a táptalaj a halliszt hasnyálmirigy-hidrolizátumát és a kazein sósav-hidrolizátumát tartalmazza táplálkozási alapként, sütő- vagy sörélesztő autolizátumot, mint növekedési stimulátort és vitaminforrást, a hemofil mikroorganizmusok növekedési stimulátorát. A táptalaj emellett glükózt, mikrobiológiai agart, polimixin-B-szulfátot, linkomicin-hidrokloridot és desztillált vizet tartalmaz. A táptalaj biztosítja a múzeumi törzsek és a gonorrhoeás betegek anyagából származó gonococcusok szaporodását, miközben megőrzi a mikroorganizmus tipikus morfológiáját, ami hozzájárul a gyakorlati egészségügyben való széles körű alkalmazásához a nemi úton terjedő betegségek diagnosztizálásában és kezelésében. 3 lap.

A találmány az orvosi mikrobiológia területére vonatkozik, és a gonorrhoea diagnosztizálására alkalmazható. Vezető külföldi cégek ("Oxoid", "Gibco", "BRL" stb.) húsemésztések és enzimlizátumok alapú táptalajokat állítanak elő gonokokkuszok tenyésztéséhez steril natív vér hozzáadásával. , száraz, az NPO Nutrient Media által gyártott , Makhachkala, amely a következő összetevőkből áll, g: pepton 8,0-12,0; arginin 0,07-0,3; cisztin 0,007-0,03; glutaminsav 1,0-1,8; EKD 4,0-7,0; tiamin-bromid 0,002-0,007; vas-nitrát 0,002-0,01; kálium-klorid 0,07-0,2; nátrium-klorid 5,0-8,0; ammónium-klorid 0,9-2,0; magnézium-szulfát 0,4-0,9; glükóz 4,0-7,0; keményítő 0,5-2,0; trisz puffer 1,0-2,5; agar 13-17,0; marhaszérum 153,0-255,0; polimixin-M-szulfát 15000-25000 U; linkomicin-hidroklorid 0,001-0,003; desztillált víz 1 literig. Ennek a tápközegnek a hátránya: alacsony érzékenység, a gonococcus növekedési intenzitásának instabilitása. Fagyasztva szárított tápközeg gonococcus izolálására (a Fegyveres Erők Kutatóintézetének gyártása, Szentpétervár), amely a táptalaj alapjából és adalékanyagokból áll a következő komponensarányban, g; Ennek a tápközegnek a hátránya: a gonococcusok növekedési intenzitására és érzékenységére vonatkozó eredmények instabilitása. A gyakorlatban a laboratóriumban elkészített ascite-mentes táptalajokat főként friss nyúlhúsból és friss szarvasmarhaszívből származó kivonatokból használják pepton és 20% szarvasmarhaszérum vagy steril natív vér hozzáadásával. A gonorrhoea diagnosztizálásához szükséges hazai tápközeg hiánya, illetve azok minősége kritikát okoz a gyakorlati egészségügyi szolgálat részéről. A találmány célja olyan száraz tápközeg létrehozása, amely biztosítja az eredmények stabilitását a növekedési ütem és túlérzékenység, amely a gonococcus diagnosztizálására nem rosszabb a kereskedelmi médiánál, és előállításához nem élelmiszeripari termékeket használ. A problémát a táptalaj komponens összetételének kiegyensúlyozása oldja meg, amely tápfehérje bázist, sütő- vagy sörélesztő autolizátumot, agart, nátrium-kloridot, idegen mikroflóra inhibitorokat linkomicin-hidrokloridot és polimixin-B-szulfátot tartalmaz, táplálkozási alapként hasnyálmirigy-hidrolizátumot tartalmaz. haltakarmány liszt és kazein sósav-hidrolizátum, emellett tartalmaz hemofil mikroorganizmusok növekedési stimulátorát (a fekete albumin enzimatikus hidrolizátuma), glükózt; l: halliszt hasnyálmirigy-hidrolizátumát 22,0-28,0 kazein savas hidrolizátumot 2,8-3,2 baker-autolizátumot sörélesztő 0,8-1,2 hemofil mikroorganizmusok növekedési stimulátora 2,0-10,0 glükóz 9,0 -11,0 nátrium-klorid 2,9-3,1 mikrobiológiai agar 12,0-15,0 polimixin-B-szulfát 15000 U-25000
linkomicin-hidroklorid 0,001-0,003
desztillált víz 1 l-ig
pH 7,3+0,2
A tápközeg összetevőinek mennyiségi aránya és pH-ja biztosítja emelt szint a gonococcus növekedésének intenzitása és a környezet érzékenysége. A táptalajt a következőképpen készítjük el: a fő összetevők kimért adagjait desztillált vízzel töltött lombikba töltjük. A táptalajt alaposan összekeverjük, és a lombikot pamut-gézdugóval lezárva (115-119) o C-on 30 percig sterilizáljuk. majd lehűtjük (45-50) o C-ra és sterilre, előzőleg steril sóoldatban feloldva. oldatot, adjunk hozzá lemért polimixin-B-szulfátot és linkomicin-hidrokloridot. A táptalajt összekeverjük és steril Petri-csészékbe öntjük. A tápközeg biológiai ellenőrzésére múzeumi törzsekből származó Neisseria gonorrhoeae tenyészetet és gonorrhoeás betegektől származó anyagot használtak. Minden növényt (37+0,5) o C hőmérsékleten, 10% CO 2 légkörben, magas páratartalom mellett 24-48 órán át termesztettek: adatok az 1. táblázatban. 1. példa A javasolt környezet ellenőrzése vetéssel történt. Neisseria gonorrhoeae törzsek és klinikai anyag a következő összetételű táptalajon, g:
halliszt hasnyálmirigy-hidrolizátuma 22.0
sütőélesztő autolizátum 0,8
kazein sósav-hidrolizátuma 2.8
hemofil mikroorganizmusok növekedési stimulátora 2.0
glükóz 9.0
nátrium-klorid 2.9
mikrobiológiai agar 12.0
polimixin-B-szulfát 15000 egység
linkomicin-hidroklorid 0,001
desztillált víz 1 l-ig
pH 7,3+0,2
Az eredményeket 24-48 órás tenyésztés után rögzítettük. 2. példa: A javasolt környezet ellenőrzését Neisseria gonorrhoeae törzsek és klinikai anyag oltásával végeztük olyan táptalajra, amely a következő összetételű komponensek optimális tartalmát tartalmazza, g:
halliszt hasnyálmirigy-hidrolizátuma 25.0
sütőélesztő autolizátum 1.0
kazein sósav-hidrolizátuma 3.0
hemofil mikroorganizmusok növekedési stimulátora 5.0
glükóz 10,0
nátrium-klorid 3.0
mikrobiológiai agar 13.0
polimixin-B-szulfát 20000 egység
linkomicin-hidroklorid 0,002
desztillált víz 1 l-ig
pH 7,3+0,2
Az eredményeket 24-48 órás tenyésztés után rögzítettük. 3. példa: A javasolt táptalaj ellenőrzését Neisseria gonorrhoeae törzsek és klinikai anyag beoltásával végeztük olyan táptalajra, amely maximálisan tartalmazza a következő komponenseket, g:
halliszt hasnyálmirigy-hidrolizátuma 28.0
sütőélesztő autolizátum 1.2
kazein sósav-hidrolizátuma 3.2
hemofil mikroorganizmusok növekedési stimulátora 10.0
glükóz 11,0
nátrium-klorid 3.1
mikrobiológiai agar 15.0
polimixin-B-szulfát 25000 egység
linkomicin-hidroklorid 0,003
desztillált víz 1 l-ig
pH 7,3+0,2
Az eredményeket 24-48 órás tenyésztés után rögzítettük. 4. példa A javasolt környezet ellenőrzését úgy végeztük, hogy Neisseria gonorrhoeae törzseket és klinikai anyagot olyan táptalajra vetünk, amely megsértette a következő összetétel komponenseinek mennyiségi arányát, g:
halliszt hasnyálmirigy-hidrolizátuma 31.0
sütőélesztő autolizátum 1.4
kazein sósav-hidrolizátuma 3.4
hemofil mikroorganizmusok növekedési stimulátora 15.0
glükóz 13,0
nátrium-klorid 3.5
mikrobiológiai agar 20.0
polimixin-B-szulfát 30000 egység
desztillált víz 1 l-ig
pH 7,3+0,2
Az eredményeket 24-48 órás tenyésztés után rögzítettük. 5. példa A javasolt táptalaj ellenőrzését úgy végeztük el, hogy Neisseria gonorrhoeae törzseket és klinikai anyagot olyan táptalajra vetünk, amely megsértette a következő összetétel komponenseinek mennyiségi arányát, g:
halliszt hasnyálmirigy-hidrolizátuma 18.0
sütőélesztő autolizátum 0,5
kazein sósav-hidrolizátuma 2.5
hemofil mikroorganizmusok növekedési stimulátora 0.5
glükóz 5.0
nátrium-klorid 2.5
mikrobiológiai agar 10.0
polimixin-B-szulfát 10000 egység
linkomicin-hidroklorid 0,005
desztillált víz 1 l-ig
pH 7,3+0,2
Az eredményeket 24-48 órás tenyésztés után rögzítettük. A 2. táblázat megadja Összehasonlító jellemzők klinikai anyagokból és múzeumi törzsekből származó gonococcusok növekedése a javasolt és ismert táptalajokon 24-48 órás növekedés után. A telepek és a festett kenetek morfológiája minden vizsgált táptalajon megegyezik a gonococcusra jellemzővel. A 2. táblázatból látható, hogy a gonococcusok szaporodási intenzitásának és érzékenységének javasolt környezete jobb, mint a kereskedelmi média. A táptalaj összetevőinek mennyiségi arányának megsértése a javasolt környezet mikrobiológiai minőségének éles romlásához vezet. A javasolt környezet lehetővé teszi a Nisseria gonorrhoeae törzsek (mind a betegektől frissen izolált, mind a múzeumi törzsek) életképességének fenntartását 9 hónapon keresztül. A 3. táblázat a Neisseria gonorrhoeae tenyészet életképességére vonatkozó adatokat tartalmazza a termesztés és a szilárd táptalajon való tárolás során,
A 3. táblázat azt mutatja, hogy a javasolt tápközeg alkalmas diagnosztikai célokra akut és krónikus gonorrhoeás betegek azonosítására, valamint a Neisseria gonorrhoeae biomasszájának kinyerésére gonovaccinák előállításához. Információs források
1. Kulturális média kézikönyv (1982)
2. A mikrobiológiai táptalaj kézikönyve (Gibco BRL 1988)
3. A táptalajok, összetevők és egyéb laboratóriumi szolgáltatások Oxoid kézikönyve. (Oxoid Limited 1979)
4. BBL termékek és laboratóriumi eljárások kézikönyve. 1991. 5. Auth. bizonyítvány N 1451167 szül Gadzhieva et al. "Tápanyag táptalaj a gonokokk izolálásához". 6. FS 42-146 VS-88 Gonococcus izolálására szolgáló táptalaj, száraz.

Követelés

1 Gonococcus izolálására és tenyésztésére szolgáló táptalaj, amely tápalapot, sütő- vagy sörélesztő autolizátumot, mikrobiológiai agart, nátrium-kloridot, idegen mikroflóra gátlót és desztillált vizet tartalmaz, azzal jellemezve, hogy halliszt hasnyálmirigy-hidrolizátumát és sósavat tartalmaz kazein hidrolizátum tápanyagbázisként , ezenkívül hemofil mikroorganizmusok növekedési stimulátorát, glükózt, valamint polimixin-B-szulfátot és linkomicin-hidrokloridot, mint az idegen mikroflóra gátlását tartalmazza a következő komponensarányban, g/l: vagy sörélesztő7 0,8 1,23 Növekedés hemofil mikroorganizmusok stimulátora7 2 103 Glükóz7 9 113 Nátrium-klorid 7 2,9 3,13 Mikrobiológiai agar7 12 - 153 Polimixin-B-szulfát, U7 15000 250003 Linkomicin-hidroklorid7 pH 70tl-ig 0,0031 ónozott víz. 7,3 + 0,2

Hasonló szabadalmak:

A találmány orvosi biotechnológiára vonatkozik, és bakteriális eredetű készítményből származó meningococcus adhezin előállítására vonatkozik, amelyet például a meningococcusok adhéziós fokának meghatározására használnak a makroorganizmus sejtekkel való kölcsönhatása során.