Nátrium-foszfát puffer. OFS.1.3.0003.15 Pufferoldatok. Vérpuffer rendszerek

Alkalmazás

A nátrium-foszfát puffert széles körben használják, mivel izotóniás és nem toxikus a sejtekre. A PBS-t anyagok feloldására, sejteket tartalmazó tartályok öblítésére használják.

Főzés

A nátrium-foszfát puffer elkészítésének számos módja van. Egyes tápszerek nem tartalmaznak káliumot, mások kalciumot vagy magnéziumot tartalmaznak.

1 liter egyszeres nátrium-foszfát puffer elkészítéséhez használja:

• 8,00 g NaCl
• 0,20 g KCl
• 1,44 g Na2HPO 4
• 0,24 g KH2PO4
• 800 ml desztillált vízben feloldjuk
• állítsa be a pH-t 7,4-re sósavval vagy nátrium-hidroxiddal
• adjunk hozzá desztillált vizet 1 literhez.

Tíz liter tízszeres PBS törzsoldatot készíthetünk úgy, hogy 800 g NaCl-t, 20 g KCl-t, 144 g Na 2 HPO 4-et és 24 g KH 2 PO 4-t 8 liter desztillált vízben feloldunk úgy, hogy a térfogatot hozzáadjuk. tovább tíz literre. A kapott oldat pH-ja körülbelül 6,8 lesz, de egyetlen PBS-re hígítás után 7,4 lesz. Az oldat elkészítése után pH-mérővel ellenőrizze a pH-értéket. Szükség esetén a pH-t sósavval vagy nátrium-hidroxiddal lehet beállítani.

A legtöbb egyszerű módon A nátrium-foszfát puffer előállítása a kereskedelemben kapható tablettakészítmények alkalmazása. Az ilyen tablettákat desztillált vízzel előre meghatározott térfogatra hígítjuk, és előre meghatározott koncentrációjú oldatot kapunk.

Sejttenyészeteknél az oldatot aliquot részekre kell osztani, és autoklávozással sterilizálni kell (20 perc 121 °C-on, folyadék üzemmódban). Sterilizálás nem szükséges, használattól függően. A nátrium-foszfát puffer szobahőmérsékleten tárolható, de a nem steril puffer hosszú távú tárolása hűtőszekrényben javasolt a baktériumok elszaporodásának megakadályozása érdekében. A tömény törzsoldatokban a sók kicsapódhatnak a hűtés során, ezért felhasználás előtt javasolt a tömény oldatot szobahőmérsékletre melegíteni, és megvárni, amíg a csapadék teljesen feloldódik.

Megjegyzések

Lásd még

Wikimédia Alapítvány. 2010 .

A PBS (foszfáttal pufferolt sóoldat) egy általánosan használt immunhisztokémiai festőpuffer, és gyakran használják a biológiai kutatásokban. Az oldatok ozmolaritása és ionjainak koncentrációja megfelel a koncentrációnak emberi test(izotóniás).

A PBS nátrium-hidrogén-foszfátot, nátrium-kloridot és bizonyos esetekben kálium-kloridot és kálium-dihidrogén-foszfátot tartalmazó vizes oldat.

Immunfluoreszcens festés IHC-hez

Az immunfluoreszcens festés volt az immunhisztokémiai (IHC) festés első módszere. Az antigén-antitest kötési reakció alapjával az antigének láthatóvá válnak fluoreszcens festékek segítségével, amikor antitestekhez kapcsolódnak. A folyamat akkor következik be, amikor egy bizonyos hullámhosszú gerjesztő fény aktiválja fluoreszcens mikroszkóp alatt. Az immunhisztokémia az antigének (pl. fehérjék) kimutatásának folyamatát jelenti egy szövetmetszet sejtjeiben a biológiai szövetekben található antigénekhez specifikusan kötődő antitestek elve alapján.

foszfáttal pufferolt sóoldat (PBS) használata

A foszfáttal pufferolt sóoldat számos felhasználási területtel rendelkezik, mivel izotóniás és a legtöbb sejtre nem mérgező. Alkalmazható anyagok hígításához és sejteket tartalmazó edények mosására. A PBS hígítóként használható a biomolekula szárítási eljárásokban, mivel a benne lévő vízmolekulák egy anyag (például fehérje) köré épülnek fel, amelyet "szárítanak" és szilárd felületre rögzítenek.

Az anyaghoz kötődő vékony vízréteg megakadályozza a denaturációt vagy más konformációs változásokat. A karbonát pufferek ugyanerre a célra használhatók, de kisebb hatékonysággal. A PBS referenciaspektrum biztosítására is használható a fehérje adszorpciójának ellipszometriás mérése során.

PBS készítése

A PBS elkészítésének sokféle módja van.

Egyes tápszerek nem tartalmaznak káliumot, míg mások kalciumot vagy magnéziumot tartalmaznak. Az alábbi pufferrecept, amely viszonylag egyszerű, 10-szeres PBS (0,1 M) törzsoldathoz készült. Lehetőség van Tween hozzáadására is. Az egész folyamat körülbelül 10 percet vesz igénybe.

Hogyan készítsünk foszfáttal pufferolt sóoldatot (PBS)

1. Mérjük le a következőket: 10,9 g vízmentes kétbázisú nátrium-foszfát (Na2HPO4), 3,2 g vízmentes nátrium-foszfát egybázisú (NaH2PO4) és 90 g nátrium-klorid (NaCl).
2. A fentieket csak 1 liter desztillált vízben oldja fel.
3. Állítsa a pH-értéket 7-re. 4.
4. Készítse el az oldatot 1 liter végső térfogatra.
5. (nem szükséges). 0,5% Tween 20-at tartalmazó oldathoz adjon 5 ml Tween 20-at 1 literes oldathoz.
6. Használat előtt 10X hígítsa fel, és szükség esetén állítsa be a pH-t.

• Szobahőmérsékleten tárolandó.
• A nem combcsont-reagensek helyettesíthetők, de a hozzáadott vízmolekulák befogadásához újra kell számolnia mindegyik megfelelő tömegét.

Mire van szüksége PBS-puffer készítéséhez

• Egyfázisú nátrium-foszfát (vízmentes)
• Kétbázisú nátrium-foszfát (vízmentes)
• nátrium-klorid
• Mérleg- és súlycsónakok
• Mágneses keverő és keverő > pH-szonda, kalibrált és megfelelő pH-beállító oldatok
• 1 literes mérőlombik
• Tween 20 (opcionális)

A pufferoldatok pH-értékét a Henderson-Hasselbach egyenlet alapján számítjuk ki:

– savas puffer esetén az egyenletnek van alakja

– a fő pufferhez

Az egyenletek azt mutatják, hogy egy adott összetételű pufferoldat pH-ját a sav és a só vagy a bázis és a só koncentrációjának aránya határozza meg, ezért nem függ a hígítástól. Ha az oldat térfogata változik, akkor az egyes komponensek koncentrációja ugyanannyiszor változik.

Puffer kapacitás

A pufferoldatok állandó pH-értéket fenntartó képessége korlátozott. Azok. sav vagy lúg hozzáadása a pufferoldat pH-értékének jelentős megváltoztatása nélkül csak korlátozott mennyiségben lehetséges.

Azt az értéket, amely jellemzi a pufferoldat azon képességét, hogy ellensúlyozza a közeg reakciójában bekövetkező eltolódást savak és lúgok hozzáadásakor, az oldat pufferkapacitásának nevezzük (B).

A pufferkapacitást egy erős sav vagy bázis mólekvivalenseinek számával mérjük, amelyet 1 liter pufferoldathoz adva eggyel megváltoztatjuk a pH-t.

Matematikailag a pufferkapacitás meghatározása a következő:

B sav szerint (mol/l vagy mmol/l):

,

ahol n(1/z HA) a sav mólekvivalenseinek száma, pH 0 és pH a pufferoldat pH-ja a sav hozzáadása előtt és után, V B a pufferoldat térfogata.

Lúgban (mol / l vagy mmol / l):

,

ahol n (1/z VOH) a lúg mólekvivalenseinek száma, a többi jelölés ugyanaz.

A puffer kapacitása számos tényezőtől függ:

1. A hozzáadott anyagok és a pufferoldat komponenseinek jellegéből. Mert egyes anyagok oldhatatlan vegyületeket vagy komplexeket képezhetnek, vagy egyéb nemkívánatos reakciókat válthatnak ki a pufferrendszer komponenseivel, akkor a pufferkapacitás fogalma értelmét veszti.

2. A pufferrendszer komponenseinek kezdeti koncentrációjából.

Minél több a sav-bázis pár komponenseinek száma az oldatban, annál nagyobb az oldat pufferkapacitása.

A pufferoldat komponenseinek koncentrációinak arányának határa, amelynél a rendszer még megőrzi tulajdonságait. A pH intervallum = pK ± 1 a rendszer pufferhatási zónájának nevezzük. Ez megfelel a Sóval /C-vel arány 1/10 és 10/1 közötti tartományának.

B - (vér) = 0,05 mol / l; B - (plazma) = 0,03 mol / l; B to (szérum vér) = 0,025 mol / l

Vérpuffer rendszerek

Különösen nagyon fontos A pufferrendszerek az organizmusok sav-bázis egyensúlyának fenntartásában vannak. A legtöbb intracelluláris folyadék pH-értéke 6,8 és 7,8 között van.

A sav-bázis egyensúlyt az emberi vérben a hidrokarbonát, foszfát, fehérje és hemoglobin pufferrendszerek biztosítják. A vérplazma normál pH-értéke 7,40 ± 0,05.

A hemoglobin pufferrendszer biztosítja a vér 35%-os pufferkapacitását: . Az oxihemoglobin erősebb sav, mint a redukált hemoglobin. Az oxihemoglobin általában káliumsó formájában van.

Karbonát puffer rendszer : az első helyen áll a hatalom tekintetében. Szénsav (H 2 CO 3) és nátrium- vagy kálium-hidrogén-karbonát (NaHCO 3, KHCO 3) képviseli 1/20 arányban. A bikarbonát puffert széles körben használják a szervezet sav-bázis zavarainak kijavítására.

Foszfát puffer rendszer . A dihidrofoszfát gyenge sav tulajdonságaival rendelkezik, és kölcsönhatásba lép a vérbe jutó anyagokkal lúgos ételek. A hidrofoszfát gyenge lúg tulajdonságaival rendelkezik, és reagál erősebb savakkal.

A fehérjepufferrendszer amfoter tulajdonságai miatt savak és lúgok semlegesítő szerepét tölti be: savas környezetben a plazmafehérjék bázisként, bázikus környezetben savaként viselkednek:

A szövetekben pufferrendszerek is jelen vannak, ami hozzájárul a szövetek pH-értékének viszonylag állandó szinten tartásához. A fő szöveti pufferek a fehérjék és a foszfátok. A pH fenntartása szintén a tüdő és a vese segítségével történik. A felesleges szén-dioxid a tüdőn keresztül távozik. Az acidózisban szenvedő vesék több savas monobázisú nátrium-foszfátot választanak ki, az alkalózisban pedig több alkáli sók: kétbázisú nátrium-foszfát és nátrium-hidrogén-karbonát.

Példák problémamegoldásra

Megoldás:

Kiszámítjuk a savas pufferoldat pH-ját a képlettel, majd

Válasz: 5,76

Megoldás:

A pufferkapacitást a következő képlettel számítjuk ki:

Válasz: 0,021 mol/l

3. példa

A pufferoldat 100 ml 0,1 mol/l-ből áll ecetsavés 200 ml 0,2 mol/l-es nátrium-acetátot. Hogyan változik ennek az oldatnak a pH-ja, ha 30 ml 0,2 mol/l-es nátrium-hidroxid oldatot adunk hozzá.

Megoldás:

A pufferoldat pH-ját a következő képlettel számítjuk ki:

Ha NaOH-t adunk a pufferoldathoz, a só mennyisége nő, és a pufferoldatban a sav mennyisége csökken:

0,006 0,006 0,006

CH 3 COOH + NaOH \u003d CH 3 COONa + H 2 O

Kiszámítjuk n (NaOH) \u003d 0,03 l 0,2 mol / l \u003d 0,006 mol, ezért a pufferoldatban a sav mennyisége 0,006 mol-lal csökken, a só mennyisége pedig 0,006 mol-mal nő.

Az oldat pH-ját a következő képlettel számítjuk ki:

Tehát: pH 2 - pH 1 = 5,82 - 5,3 = 0,52

Válasz: puffer pH változása = 0,52.

Önálló megoldási feladatok

4. 2 ml vér titrálása a pH megváltoztatásához kezdő érték(7,36) a végső értékhez (7,0) 1,6 ml 0,01 M HCl-oldatot kellett hozzáadni. Számítsa ki a savpuffer kapacitását!

5. Hány mol nátrium-acetátot kell 300 ml ecetsavhoz adni ahhoz, hogy a hidrogénionok koncentrációja 300-szorosára csökkenjen (K dis (CH 3 coon) = 1,85,10 -5).

6. A biokémiai vizsgálatok során pH = 7,4 foszfátpuffert használnak. Milyen arányban kell összekeverni a nátrium-hidrogén-foszfát és a nátrium-dihidrogén-foszfát 0,1 mol / l koncentrációjú oldatait, hogy ilyen pufferoldatot kapjunk (pK (H 2 PO 4 -) \u003d 7,4).

7. A CBS milyen megsértését figyelték meg a következő mutatók: vér pH = 7,20, Pco 2 = 38 Hgmm. Art., BO = 30 mmol / l, SBO = -4 mmol / l. Hogyan lehet megszüntetni a KOS megsértését?

Tesztfeladatok

A pufferoldatok készítéséhez vegytiszta reagenseket használnak. és analitikai minőségű, speciálisan előkészítve. A reagenseket az alábbiak szerint állítjuk elő.

Kálium-foszfát monoszubsztituált, KH 2 PO 4 , molekulatömeg 136,09. 100 g gyógyszert forrásig melegítve feloldunk 150 ml vízben. Az oldatot forrón szűrjük. Folyamatos keverés mellett a szűrletet 10 °C-ra hűtjük. Ezután adjunk hozzá 150 ml etil-alkoholt. A szűrlet állandó keverése közben kivált kristályokat szívótölcséren leszűrjük, és azonos körülmények között újra átkristályosítjuk. a kristályokat tömegállandóságig szárítjuk 105...110 ºC-on. 99,9 ... 100,0% közötti főanyag-tartalmú készítmény jelenlétében az anyag előzetes előkészítése nem történik meg.

Diszubsztituált nátrium-foszfát, Na 2 HPO 4 12H 2 O, molekulatömege 358,12. A gyógyszer elkészítésének két módja van.

a) 150 g drogot 100 0 C-ra melegítve 150 ml vízben feloldunk. Az oldatot forrón szűrjük, majd lehűlés után a kivált kristályokat leszűrjük. Az átkristályosítást 100 ºC-ra való melegítéssel megismételjük. Az átkristályosodott készítményt porcelánpohárban vízfürdőben, folyamatos keverés mellett a készítmény teljes megszáradásáig melegítjük. A kapott sót exszikkátorban szárítjuk olvasztott kalcium-klorid felett a nap folyamán. Az átkristályosított készítményben (Na 2 HPO 4 ·2H 2 O) a főanyag tartalmát ellenőrizzük. Ehhez körülbelül 0,5000 g gyógyszert 50 ml vízben feloldunk, 2...3 ml telített nátrium-klorid-oldatot adunk hozzá, és metilvörös indikátor jelenlétében 0,1 N sósavoldattal titráljuk. . Ha szükséges, módosítsa a minta méretét. 1 ml pontosan 0,1 N sósav 0,0178 g Na 2 HPO 4 2H 2 O-nak felel meg.

b) 75 g gyógyszert feloldunk 250 ml 60 ºC-ra melegített vízben. Az oldatot forrón szűrjük, a szűrletet állandó keverés közben 10 ºC-ra hűtjük. A kivált kristályokat szívótölcséren leszűrjük, és azonos körülmények között újra átkristályosítjuk. A keletkezett sót először 30 ºC-ot meg nem haladó hőmérsékleten 24 órán át szárítjuk, majd kemencében 50 ºC-on 3-4 órán át, végül 120±5 ºC-on tömegállandóságig szárítjuk, megakadályozva, hogy a só kiszáradjon. olvasztó. Szárítás után a só Na 2 HPO 4 összetételű.

A reagensek elkészítése után kálium-foszfáttal monoszubsztituált és nátrium-foszfáttal diszubsztituált törzsoldatokat készítenek.

Egy 9,078 g tömegű, vízmentes kálium-foszfáttal monoszubsztituált KH2PO4-ot feloldunk vízben, és az oldat térfogatát 1 literre állítjuk be. Az oldat stabilizálása érdekében adjunk hozzá 3-4 csepp toluolt.

11,876 g tömegű nátrium-foszfáttal diszubsztituált Na2HPO412H2O-t feloldunk vízben, és az oldat térfogatát 1 literre állítjuk be. Az oldat stabilizálása érdekében adjunk hozzá 3-4 csepp toluolt.

A kiindulási oldatokból készítsünk 4,94 és 9,18 közötti pH-jú foszfát pufferoldatokat az A.2. táblázat szerint.

A.2 táblázat – 4,94 ... 9,18 pH-jú foszfát pufferoldat

Hozzáadás dátuma: 2015-08-06 | Megtekintések: 4058 |

2. Foszfát puffer (0,1 m, pH 5,8-8,0)

3. Trisz puffer (0,1 m, pH 7,1-9,2)

24,2 g trisz-(hidroxi-metil)-amino-metánt feloldunk egy 1 literes mérőlombikban (500 ml vízben). A kívánt pH-érték eléréséhez a táblázatban feltüntetett 1 M HCl-t adjuk hozzá, és a térfogatot desztillált vízzel 1000 ml-re állítjuk be.

4. Acetát puffer (0,2 m, pH 3,6-5,8)

5. Glicin puffer (0,05 m, pH 8,6-10,6)

A megadott mennyiségű glicint és nátrium-hidroxidot összekeverjük, és a térfogatot desztillált vízzel 200 ml-re állítjuk be.

3. Néhány reagens elkészítése

Aktiváló megoldás. 155 mg redukált glutationt és 400 mg kristályos albumint helyezünk egy 100 ml-es mérőlombikba, feloldjuk 50 ml desztillált vízben, és a pH-t 1 M NaOH-oldattal 8,2-re állítjuk. Ezután adjunk hozzá vizet a jelig.

Ezüst-nitrát ammóniás oldata. A 2-3%-os ezüstoldathoz tömény ammóniaoldatot adunk, amíg a csapadék fel nem oldódik.

Acetát puffer pH 3,6. Készítsünk 463 ml A oldatot és 37 ml B oldatot összekeverve, majd egy mérőlombikban vízzel jelig hígítsuk 1 literre. A oldat: Hígítsunk fel 11,55 ml jégecetet vízzel egy 1 literes mérőlombikban. B oldat: Oldjunk fel 27,2 g nátrium-acetátot vízben egy 1 literes lombikban.

Biuret reagens (Benedict reagens). 173 g nátrium-citrátot és 100 g nátrium-karbonátot feloldunk 300 ml desztillált vízben vízfürdőben. Külön feloldunk 17,3 g réz-szulfátot 300 ml vízben. Mindkét oldatot lecsepegtetjük, és a teljes térfogatot 1 literre állítjuk be.

pufferelési megoldás. 2,76 g Veronalt és 2,06 g Medinalt feloldunk 1 liter desztillált vízben. Hűtőszekrényben tárolandó; ha csapadék jelenik meg, az oldat nem alkalmas a felhasználásra.

szén szuszpenziója. 0,25 g aktív szenet helyezünk egy 100 ml-es mérőlombikba, és hígítjuk acetát pufferrel (pH 3,6). Használat előtt jól rázza fel.

Redukáló reagens. 1%-os oldat C-vitamin 0,016%-os réz-szulfát oldaton készítve.

Hemoglobin, 4%-os oldat acetát pufferben (pH 4,0). Először 8%-os hemoglobinoldatot készítünk 8 mol/l-es karbamidoldatban, 2 órán át termosztátban tartjuk 60°C-on, majd felhasználás előtt kétszer hígítjuk acetát pufferrel.

Glicyl-glicin. 0,55 mmol/l, pH 8,3. 3,63 g glicil-glicint helyezünk egy 50 ml-es mérőlombikba, és töltsük fel vízzel jelig (pufferoldat).

Denaturáló oldat

Diazo reagens bilirubin meghatározására. Készítsen két megoldást. Első oldat: 3 g szulfanilsavat 500 ml desztillált vízben feloldunk, 15 ml tömény sósavat adunk hozzá (forró fürdőben), a térfogatot vízzel 1 literre állítjuk be. Második oldat: 0,5%-os vizes nátrium-nitrit oldat. Használat előtt keverjen össze 5 ml-t az első oldatból és 0,25 ml-t a másodikból.

Diacetil, munkaoldat. 1 ml diacetilt desztillált vízzel hígítunk egy 100 ml-es mérőlombikban (az oldatot hűtőszekrényben tároljuk). A diacetil munkaoldatot felhasználás előtt úgy készítjük el, hogy 24 ml desztillált vizet adunk 1 ml diacetil törzsoldathoz.

Difenil-amin reagens. 1 g difenil-amint feloldunk 100 ml jégecetben. Az oldathoz 2,75 ml tömény kénsavat adunk.

Kalibráló oldat. Bázikus – 0,75 mmol/l ALA (100 µg/ml) bázisra vonatkoztatva: 0,00635 g ALA-hidrokloridot oldunk fel acetát pufferben (pH 3,6) egy 50 ml-es mérőlombikban. A hűtőszekrényben legfeljebb egy hónapig tárolható. A főoldatból munkakalibrációs oldatot készítünk, 1 μg/ml. Használat előtt készítse elő úgy, hogy a törzsoldatot acetát pufferrel 100-szorosra hígítsa.

Kalibráló oldat. 22,5 mg dihidroxi-acetont 25 ml vízben melegítés közben feloldunk. Ennek az oldatnak 1 ml-e 10 μmol dihidroxi-acetont tartalmaz. Számos kémcsőbe dihidroxi-aceton kalibráló oldatot öntünk (lásd a munkát), feltöltjük a szükséges térfogatig, majd a reakciót ugyanúgy hajtjuk végre, mint az enzim aktivitásának meghatározásánál.

Kalibráló (standard) vas oldat (30 µmol/l).

Először a mora sókat készítik el.

koffein reagens. 1 g tiszta koffeint, 7,5 g nátrium-benzoátot, 12,5 g nátrium-acetátot 90 ml desztillált vízben feloldunk, 50-60 °C-ra melegítünk, keverjük, lehűtjük és desztillált vízzel 100 ml-re töltjük fel.

Ammónium-molibdát salétromsavban. 7,5 g ammónium-molibdátot feloldunk 100 ml vízben, és 100 ml 32%-os salétromsavat adunk hozzá.

Vizelet alkaptonuria esetén. Kóros hiányában hidrokinont adnak a normál vizelethez 20 g/l arányban.

Vizelet hiperaminoaciduriával. Hiányában patológiás glicint adunk a normál vizelethez 1,0 g/l arányban.

Vizelet mukopoliszacharidózissal. Kóros hiányában 0,05-0,1 g / l arányban honsuridot vagy heparint adnak a normál vizelethez.

Vizelet pentosuriával. Kóros hiányában xilulózt vagy ribózt adnak a vizelethez 1,0 g/l arányban.

Vizelet tirozinózissal. Kóros hiányában 0,4-0,5 g / l arányban tirozint adnak a normál vizelethez.

Vizelet fruktosuriával. Kóros hiányában a normál vizelethez fruktózt adnak 0,3-0,4 g / l arányban.

Vizelet cisztinuria esetén. Hiányában patológiás cisztint adunk a normál vizelethez 0,4-0,5 g / l arányban.

Nátrium-acetát 3-vizes, telített oldat. 375 g vizes nátrium-acetát 3-ot (vagy 226 g vízmentes sót) feloldunk 250 ml meleg vízben, majd szobahőmérsékletre hűtjük. Szobahőmérsékleten tárolandó. Az oldatnak színtelennek és átlátszónak kell lennie.

Nátrium-foszfáttal diszubsztituált 0,25 mol/l. Készítsünk úgy, hogy 9,7 g Na 2 HPO 4 ∙12H 2 O-t vagy 18 g Na 2 HPO 4 ∙12H 2 O-t oldunk fel vízben egy 200 ml-es lombikban. Ha ebből az oldatból 2 ml-t adunk 1 ml triklór-ecetsav oldathoz, a pH-értéknek 5,0-6,0 tartományban kell lennie.

Kreatinin bázikus kalibrációs oldat, 10 mmol/l. 113,1 mg kreatinint 0,1 mol/l-es sósavoldattal 100 ml-re állítunk be. Kalibrációs grafikon készítésekor a törzsoldatból a törzsoldat 100-szoros vízzel történő hígításával munkaoldatot készítünk, az oldat 1 ml-e 0,1 mmol kreatinint tartalmaz. Ennek alapján számos kémcsövet kapunk a megfelelő kreatinkoncentrációkkal.

Oxidáló keverék tiamin meghatározásához. 8 ml 1%-os kálium-hexaciano-ferráthoz (III) 20 ml 30%-os NaOH-oldatot adunk, és alaposan összekeverjük. Használat előtt készítse elő.

Orcine reagens. 1 g orcinhoz adjunk 500 ml 30%-os sósavat (sűrűsége 1,15 g/cm3). Oldódásig keverjük, majd adjunk hozzá 4-5 ml 10%-os vas-klorid oldatot (III) FeCl 3 . A reagenst szorosan lezárt sötét üvegben tároljuk.

p-nitroanilin bázikus kalibrációs oldat. 0,0829 g p-nitroanilint 100 ml-es mérőlombikba helyezünk, vízzel jelig töltjük és feloldjuk.

Kicsapó oldat. Oldjunk fel 561 g ammónium-szulfátot 1 liter desztillált vízben, és 24 óra múlva szűrjük le.

Bázikus foszfát pufferoldat és munkaoldatai 1-4. sz. Oldjunk fel 33,5 g NaOH-t 400 ml vízben egy 500 ml-es mérőlombikban, és adjunk hozzá 226,8 g KH 2 PO 4 -ot, rázzuk teljesen feloldódásig, hűtsük le és adjunk hozzá vizet a jelig. A bázikus foszfátpuffer munkaoldatainak elkészítéséhez a bázikus foszfátpuffer következő térfogatait (ml-ben) mérjük 100 ml-es mérőlombikokba: 1. sz. - 92,51; 2. szám - 74,91; 3. sz. - 59.18 és 4. - 48.68, majd ezek tartalmát vízzel a jelig hozzák.

Pikrinsav, telített oldat. Az áru pikrinsav 15-20% nedvességet tartalmaz, ne szárítsa meg a savat. Robbanó! Oldjunk fel 2 g pikrinsavat 100 ml vízben forró fürdőben való melegítéssel. Ezt követően az oldatot 24 órán át állni hagyjuk, alkalmanként megkeverve. Ezután az oldatot szűrjük. Az oldat stabil és sötét üvegtartályban tárolandó.

Pirofoszfát puffer 0,05 M pH 8,2. Tegyünk 4,46 g nátrium-pirofoszfátot egy 200 ml-es mérőlombikba, oldjuk fel kb. 100 ml vízben, állítsuk be a pH-t 0,1 M HCl-oldattal 8,2-re, és adjunk hozzá desztillált vizet a jelig.

Pirofoszfát puffer 0,1 M pH 8,5. Tegyünk 4,46 g nátrium-pirofoszfátot egy 100 ml-es mérőlombikba, oldjuk fel 50 ml vízben, állítsuk be a pH-t 0,1 M HCl-oldattal 8,5-re, és adjunk hozzá desztillált vizet a jelig.

Működő reagens. A meghatározás napján készítsük elő 30 rész 0,3 N nátrium-hidroxid összekeverésével. 2 rész 0,5%-os fenolftalein oldat és 1 rész 0,12%-os réz-szulfát oldat.

Aceton-cianohidrin oldat. Oldjunk fel 1 ampulla aceton-cianohidrint (0,5 ml - 0,47 g a vér hemoglobintartalmának meghatározására szolgáló készletből) 1 liter desztillált vízben.

Ferriaceton-cianohidrin oldat. Oldjunk fel 200 mg kálium-ferricianidot és 1 ampulla (0,5 ml - 0,47 g) aceton-cianohidrint 1 liter desztillált vízben: reagenskészletből felhasználható transzformáló oldat készítésére a vér hemoglobinjának meghatározására. Sötét üvegedényben szobahőmérsékleten tárolva több hónapig stabil.

Gluoxidáz oldat. Körülbelül 300 egységet tartalmaz. 1 mg-ban. Úgy készítsük el, hogy a megfelelő mennyiségű száraz készítményt feloldjuk 10 ml vízben.

Szulfonált bato-fenantrolin oldat. Egy kémcsőben 0,5 ml klórszulfonsavat adunk 100 mg batofenantrolinhoz, forrásban lévő vízfürdőben 30 másodpercig melegítjük, lehűtjük, és lassan hozzáadunk 10 ml kétszer desztillált vizet, majd ismét vízfürdőn 5 percig melegítjük. Az elegyet 200 ml-es lombikba töltjük, 100 ml vizet adunk hozzá, az oldat pH-ját 4-5 N NaOH-ra állítjuk, és 200 ml-re vizet adunk hozzá.

Jód kálium-jodidos oldata (Lugol-oldat). Oldjunk fel 20 g kálium-jodidot és 10 g jódot 100 ml desztillált vízben. Használat előtt az oldatot ötször hígítjuk.

p-nitrozo-dimetil-anilin (NDMA) oldata. Egy kereskedelemben kapható NDMA-készítményt etil-éterből átkristályosítanak. Az alkohol-dehidrogenáz mérésére 1 mg NDMA-t oldunk 100 ml 0,1 M pirofoszfát pufferben (pH 8,5). A kapott oldatot papírszűrőn átszűrjük, és a szűrletet kétszer hígítjuk ugyanazzal a pufferrel. Tárolja 4°C-on két hónapig.

Ilka reagense. 5 térfogatrész ecetsavanhidridhez adjunk 1 rész jégecetet, majd fokozatosan öntsünk bele 1 rész tömény kénsavat. Tárolja a reagenst hidegen!

Millon reagens. (Nyomás alatt készen áll! ) 40 g higanyt feloldunk 57 ml tömény salétromsavban, először hidegen, majd vízfürdőben melegítjük. A kapott oldatot 2 térfogatrész vízzel hígítjuk, leülepedni hagyjuk, és az üledékből lecsepegtetjük. Tárolja sötét üvegben.

Ammónium-molibdát reagens. 2,5 g ammónium-molibdátot feloldunk 60 ml desztillált vízben, szűrjük. Az oldatot 100 ml-es lombikba öntjük. Egy másik lombikban 7,5 ml tömény kénsavat adunk 25 ml desztillált vízhez. A második oldatot hozzáadjuk az elsőhöz, lehűtjük és desztillált vízzel jelig hígítjuk. Az oldat egy hónapig alkalmas.

"NADI" reagens. A dimetil-p-fenilén-diamin 1%-os oldatát azonos térfogatú α-naftol 1%-os alkoholos oldatával és 1,5%-os nátrium-karbonát-oldattal keverjük össze. Az oldat sötétbarna színű, és nem lehet rózsaszínű. 1 órával az óra előtt készült.

Nasha reagens. Egy 100 ml-es lombikba 15,4 g ammónium-acetátot, 0,3 g jégecetet és 0,2 g acetil-acetont adunk, desztillált vízben feloldjuk, és a térfogatot a jelre állítjuk.

Nessler-reagens. Egy 500 ml-es mérőlombikban 150 g kálium-jodidot, 110 g jódot, 100 ml desztillált vizet és körülbelül 140-150 g fémhiganyt keverünk össze, és 15 percig erőteljesen rázzuk. Ebben az esetben az oldat spontán felmelegszik, és az oldott jód miatt a szín fokozatosan elsápad. A keveréket ezután folyó víz alatt lehűtjük, amíg a vörös szín meg nem marad, majd a tartalmát addig rázzuk, amíg a vörös szín zöldesre változik. Dekantálás után a higanycsapadékot vízzel alaposan mossuk. Keverjük össze az oldatot és a mosófolyadékot, hígítsuk fel vízzel 2 literre. A kapott oldatból 75 ml-t 75 ml vizet és 350 ml 10%-os nátrium-hidroxid-oldatot tartalmazó 0,5 literes mérőlombikba vigyünk, és vízzel jelig hígítsuk.

Fehling-reagens. Két oldatot külön-külön készítenek. 1. oldat: Oldjunk fel 200 g Rochelle-sót és 150 g NaOH-t egy 1 literes mérőlombikban, és hígítsuk jelig vízzel. 2. oldat: egy 1 literes mérőlombikban oldjunk fel 40 g réz(II)-szulfátot vízben, és hígítsuk fel vízzel jelig. Használat előtt keverje össze egyenlő térfogatú oldatokat.

Folin reagense. Egy 1 literes lombikban oldjunk fel 1 g nátrium-volframátot és 20 g foszfomolibdénsavat 750 ml vízben. Zárjuk le a lombikot visszafolyóhűtővel ellátott dugóval, és a hűtőszekrényben lévő víz áramlását bekapcsoljuk, és a tartalmát 10 órán át forraljuk; majd lehűtjük, mérőlombikba öntjük és a reagens vizes térfogatát 1 literre állítjuk be.

Erlich reagense. 0,7 g p-dimetil-amino-benzaldehidet feloldunk 150 ml tömény sósavban, 100 ml vízhez adjuk és összekeverjük. Az oldatnak színtelennek vagy enyhén sárgának kell lennie. Tárolja sötét üvegedényben. A reagens stabil.

Erlich reagense. Oldjunk fel 1 g p-dimetilaminobenzaldehidet egy 50 ml-es mérőlombikban 35 ml jégecetben, adjunk hozzá 8 ml 57%-os perklórsavat, és töltsük fel jelig jégecettel. Sötét üvegedényben tároljuk hűtőszekrényben legfeljebb egy hétig.

Timol-alkohol oldat (10%). 10 g tisztított timolt feloldunk 100 ml 96˚-os etil-alkoholban. A tisztított timol kinyerését az alábbiak szerint végezzük. 100 g timolt feloldunk 100 ml 96˚-os etil-alkoholban, szűrjük. Adjunk hozzá 1 liter hideg desztillált vizet a szűrlethez, rázzuk fel erőteljesen és hagyjuk állni 20 percig. A szűrőt leszűrjük, és a szűrőn visszamaradt kristályokat kétszer mossuk hideg desztillált vízzel. Szárítsa először szűrőpapíron, majd 2-3 napig exszikkátorban vízmentes kalcium-klorid felett tömegállandóságig.

Átlagos megoldás. A standard oldatot két oldat összekeverésével készítjük: 1) 0,0962 n bárium-klorid oldat: 1,175 g kristályos BaCl 2 ∙ 2H 2 O-t 100 ml vízben egy mérőlombikban oldunk. 2) 0,2 N kénsavoldat. Ezután bárium-szulfát szuszpenziót kapunk: 3 ml 0,0962 N bárium-klorid oldatot öntünk egy 100 ml-es mérőlombikba, és a térfogatot 0,2 N-re állítjuk be kénsavoldattal + 10 °C hőmérsékleten. (ezen a hőmérsékleten a kicsapódott bárium-szulfát részecskemérete viszonylag stabil eredményt ad).

Szubsztrát pufferoldat: öntsünk 10 ml vizet egy kémcsőbe, adjunk hozzá 0,028 g L-glutamil-p-nitroanilint és 0,082 g nátrium-kloridot, majd keverés nélkül oldjuk fel a kémcső tartalmát forrásban lévő vízfürdőben 60 másodpercig. . Az oldatot ezután 37 °C-ra hűtjük, és 2,5 ml pufferoldatot adunk hozzá. Az elkészített hordozóoldatot működés közben 37°C-os vízfürdőben tároljuk. A fel nem használt szubsztrátum oldat legfeljebb egy hétig tárolható hűtőszekrényben. A szubsztrát rosszul oldódik és szobahőmérsékleten kicsapódik. Ezért felhasználás előtt a kikristályosodott szubsztrátumot forrásban lévő vízfürdőben melegítve feloldjuk. Az aljzat felmelegítése és feloldása legfeljebb kétszer megismételhető.

Szubsztrát oldat az ALT meghatározásához (1. sz. oldat). 29,2 mg α-ketoglutársav és 1,78 g alanin (0,89 g α-alanin) mintáját analitikai mérlegen lemérjük, és 1 M nátrium-hidroxid-oldatban oldjuk, amíg a csapadék teljesen fel nem oldódik (pH 7,4). Az oldatot 100 ml-es lombikba öntjük, és a térfogatot 0,1 M foszfátpufferrel (pH 7,4) a jelig beállítjuk. Adjunk hozzá 1 csepp kloroformot. Az oldatot fagyasztva hűtőszekrényben tárolják.

Szubsztrát oldat az AsAT meghatározásához (2. oldat). 29,2 mg α-ketoglutársav és 2,66 g α-aszparaginsav (1,33 g α-aszparaginsav) mintát mérünk le analitikai mérlegen. Ezután az oldatot az 1. számú oldattal megegyező módon készítjük el.

Szubsztrát oldat a glükóz-foszfát izomeráz meghatározásához. Medinal-acetát pufferoldatot készítünk (pH 7,4) (9,714 g nátrium-acetátot és 14,714 g medinált vízben oldunk, és a térfogatot 500 ml-re állítjuk be). Keverjünk össze 8,33 ml 0,03 M glükóz-6-foszfát dinátriumsó-oldatot 25 ml mediális acetát pufferrel; adjunk az elegyhez 25 ml 0,1 M sósavoldatot, és hígítsuk fel vízzel 100 ml-re. Tartsa hidegen.

Szubsztrát oldat a laktát-dehidrogenáz meghatározásához. Keverjünk össze 1 ml 1 M nátrium-laktát oldatot, 9 M NaCl oldatot, 0,05 M Cl 2 , 10 g/L NAD oldatot. 2,5 ml 0,5 M foszfát pufferoldatot (pH 7,4) és 1 g/l nitrotetrazolium kék oldatot adunk a tartalomhoz. Használat előtt 0,25 ml 1 g / l koncentrációjú fenanzin-metaszulfát oldatot adunk az elegyhez.

Szubsztrát oldat a fruktóz-biszfoszfát-aldoláz meghatározásához. 270 mg fruktóz-biszfoszfát báriumsót feloldunk 3,5 ml 1 M sósavban. 1 ml 14%-os nátrium-szulfát-oldatot adunk hozzá, és a képződött csapadékot centrifugálással eltávolítjuk. Adjunk 1 csepp nátrium-szulfátot a felülúszóhoz. A zavarosság megjelenése a báriumionok nem kellően teljes lerakódását jelzi. Ebben az esetben további nátrium-szulfátot adunk hozzá, és ismét centrifugáljuk. A centrifugát pH-ját 3%-os nátrium-hidroxid-oldattal 7,4-7,6-ra állítjuk, 25 ml-es lombikba töltjük, és a térfogatot a jelre állítjuk. A kapott oldatot összekeverjük 25 ml 0,56 M hidrazin-klorid oldattal, 25 ml 0,002 M monojód-ecetsav oldattal, 100 ml 0,5 %-os nátrium-karbonát oldattal és 25 ml desztillált vízzel. Hűtőszekrényben tárolva.

Thymol-veronal puffer. Egy 100 ml-es mérőlombikban keverjünk össze 80 ml pufferoldatot és 1 ml timol 10%-os alkoholos oldatát, rázzuk össze és adjuk hozzá a pufferoldatot a jelig. A pH-értéknek 7,55-nek kell lennie.

o-toluidin reagens. 0,15 g tiokarbamidot feloldunk 94 ml jégecetben, és összekeverjük 6 ml desztillált O-toluidinnel. Sötét üvegben tárolva.

Vízzel telített fenol. 100 g desztillált fenolhoz 35 ml vizet adunk, és a fenol oldódásának felgyorsítása érdekében az elegyet enyhén melegítve keverjük.

Fenolftalin, munkaoldat. 75 mg anyag 15 ml 0,1 N nátrium-hidroxid-oldatban való feloldásával készítsük el, az oldat színtelen vagy enyhén rózsaszínű legyen, a színes oldatok nem alkalmasak a munkára. A reagens ellenállásának növelésére 3 mg trilont adnak hozzá, amely a nehézfémek sóinak megkötésével megakadályozza a fenolftalein légköri oxigén általi autooxidációját.

Fibrin. A szarvasmarhavér fibrinjét a vér pigmentjeiről mossák ki folyóvíz néhány napig, amíg fehér vérrög keletkezik. A vizet kinyomják, és a glicerinnel töltött fibrint szorosan lezárt edényben tárolják. Használat előtt a fibrint glicerinből mossák.

Foszfor-vanillin reagens. 4 térfogatrész tömény foszforsavat összekeverünk 1 rész 0,6%-os foszforsavval. vizesoldat vanillin. A reagenst sötét üvegedényben, szobahőmérsékleten tároljuk.

Fruktóz 1,6-biszfoszfát, nátriumsó. 2,0 ml 10%-os fruktóz-1,6-biszfoszfát nátriumsó-oldatot 25 ml-es lombikban vízzel jelig hígítunk. Hűtőben tárolva stabil.

Színes reagens karbamidhoz. A diacetil-monoximot és tioszemikarbazidot tartalmazó karbamid meghatározására szolgáló kitből származó tablettát melegítéssel feloldjuk egy 50 ml-es lombikban. Az oldat három hétig stabil. Használat előtt keverje össze az elkészített oldatból egyenlő térfogatú 9,6%-os kénsavoldatot.

β-glicerofoszfát lúgos oldata. Egy 100 ml-es mérőlombikba adjunk hozzá 1 g nátrium-β-glicerofoszfátot és 0,85 g mediált, adjunk hozzá körülbelül 30 ml desztillált vizet, oldjuk fel, és töltsük fel a térfogatot a jelig vízzel. Egy másik, 100 ml-es mérőlombikba adjunk hozzá 50 ml β-glicerofoszfát elkészített oldatát, 2,8 ml 0,1 M nátrium-hidroxid-oldatot, és töltsük fel jelig desztillált vízzel (az oldat pH-ja 8,6). Tegyünk a folyadékra körülbelül 3 ml toluolt. Az oldatot legfeljebb 10 napig tárolja a hűtőszekrényben.