Как подсчитать лейкоциты в камере горяева. Камера Горяева. Практическое применение. Подсчета лейкоцитов в счетной камере

Общий подсчет лейкоцитов проводится при исследовании крови. Определяют количество не только белых кровяных телец, но и других форменных элементов. С помощью метода подсчета лейкоцитов можно выявить не только отклонение иммунной системы, но и другие заболевания и состояния. В определяется количество эритроцитов, гемоглобина, тромбоцитов, лейкоцитарная формула, СОЭ.

Дифференцированный подсчет количества лейкоцитов позволяет выявить процентное соотношение их популяции. Проводят исследование на полуавтоматическом анализаторе. Если у врача остаются сомнения, назначают ручное исследование мазка крови. С его помощью можно определить состояние клеток, их внешний вид.

В лейкоцитарной формуле определяются следующие показатели:

• нейтрофилы;
• базофилы
• эозинофилы;
• моноциты;
• лимфоциты.

С помощью общего анализа крови можно не только следить за состоянием иммунной системы, но и выявить другие факторы, вызывающие нарушения в организме. Определяют следующие нарушения:

Определяется не только количественный состав лейкоцитарной формулы, но и наличие молодых или более взрослых клеток. Поэтому говорят о сдвиге формулы влево (к молодым клеткам) или вправо (к зрелым клеткам).

Увеличение количества молодых нейтрофилов может быть в следующих случаях:

• воспаление;
• некроз (омертвление) тканей;
• инфекция;
• отравление;
• приём лекарственных средств;
• временное физиологическое повышение клеток.

Сдвиг лейкоцитарной формулы вправо бывает в следующих случаях:

• лучевая болезнь;
• гиповитаминоз;
• почечная недостаточность;
• печеночная недостаточность;
• временное изменение состава крови после переливания.

Методики подсчета количества лейкоцитов

Существуют разные методики дифференцированного подсчета формулы лейкоцитов. Врач подбирает их в зависимости от оснащённости клиники, предполагаемого диагноза, состояния пациента.

• Дифференцированный подсчет абсолютного количества лейкоцитов по номограмме. Выявляются все разновидности клеток, их процентное соотношение. Определяют повышенное или пониженное значение какого-либо показателя. Отрицательная сторона - не выявляется форма, размер, повреждение клеток. Методика выполняется на полуавтоматическом анализаторе.
• Дифференцированный подсчет отдельных форм лейкоцитов. Анализ необходим при выявлении нарушения в общей формуле лейкоцитов. Врач назначает лечение, с помощью исследования следит за его тенденцией. Выполняется на полуавтоматическом анализаторе.
• Визуальный подсчёт количества лейкоцитов с помощью микроскопа и счётной камеры. Врач визуально подсчитывается количество клеток в заданном объеме жидкости, оценивает их форму, размер, целостность.

Подсчет лейкоцитов в счетной камере

Для подсчета количества лейкоцитарных клеток используется специальная камера, сверху которой накладывается предметное стекло. На углублениях счетного приспособления имеется микроскопическая сетка с большими и малыми квадратами, по которым подсчитывают форменные элементы. Приспособление должно быть стерильным, подготовленным к работе.

Исследование проводится в несколько этапов.

• Полученную кровь для подсчета лейкоцитов разводят в 20 раз с помощью уксусной кислоты.
• Образовавшуюся жидкость набирают с помощью стеклянной палочки, добавляют внутрь камеры.
• Наводят микроскоп, подсчитывает все лейкоциты при его перемещении слева направо, вниз, справа налево. Лейкоциты в крови подсчитывают в 100 квадратах, в моче - по всей сетке.
• Полученные данные подставляют в лейкоцитарную формулу подсчета, вычисляя общее количество лейкоцитов. Это необходимо, так как кровь была разведена.

При просмотре мазка врач не только подсчитывает количество клеток, но и обращает внимание на их внешний вид. При выявлении поврежденных или измененных клеток, это записывается на бланк исследования.

Важно! Подсчёт количества лейкоцитов с помощью камеры может быть использован для крови и мочи.

Растворы и реагенты для подсчета лейкоцитов

Для использования счётной камеры необходимы подготовленные реагенты. Врач должен знать, как приготовить кровь для подсчета лейкоцитов.

• Раствор уксусной кислоты для подсчета лейкоцитов, 3-5 %. Необходим для разведения крови, уничтожения эритроцитов. Красные кровяные тельца могут мешать просмотру лейкоцитов.
• Метиленовый синий. Белые кровяные тельца прозрачны, невидимы без использования специфических реагентов. Метиленовый краситель подкрашивает клетки так, что видна их мембрана и внутренняя структура. Лаборант может рассмотреть гранулы внутри клетки, повреждения, нарушения, атипичность.
• Этиловый спирт необходим для обеззараживания поверхности счётной камеры и предметных стёкол. Перед использованием приспособление протирают, после завершения исследования его полностью погружают в этиловый спирт.
• Дистиллированная вода. Необходима для удаления следов этилового спирта.

Подсчёт лейкоцитов на анализаторе

Для точного расчета всех форменных элементов используют подсчет количества лейкоцитов на гематологическом анализаторе. Он вычисляет клетки в 1 мл биологической жидкости. Выделяют два вида анализаторов:

• кондуктометрический (прибор просвечивает форменные элементы, вычисляя их разные параметры, что позволяет рассчитать эритроциты, тромбоциты, лейкоциты);
• светооптический (вычисляет не только количество клеток, но и их качество).

Для исследования собирают свежую кровь или мочу, выделяют 1 мл. Для подсчёта лейкоцитов необходимо разведение специальными реагентами, которые устраняют наличие эритроцитов. Врач-лаборант закладывает биологическую жидкость внутрь аппарата, который сам подсчитывает форменные элементы. Прибор выдает результат анализа, который отправляют врачу.

Достоинства техники подсчета лейкоцитов:

• снижение риска врачебной ошибки;
• определение большого количества анализов за один рабочий день;
• точность подсчёта клеток.

Отрицательные стороны метода:

• высокая стоимость аппарата, который могут позволить не все клиники;
• отсутствие визуального осмотра состояния клеток.

При подсчете на анализаторе лейкоциты имеют обозначение LEU, выражаются в мкл (микролитрах).

Подсчеты остаточных лейкоцитов

Для оптического просмотра и подсчета количества остаточных лейкоцитов возможно использовать аппарат ADAM. Для этого используют флюоресцентное вещество, которое помечает только лейкоциты. В отношении тромбоцитов и эритроцитов оно не применимо.

Метод выполняется в несколько этапов:

• взятие капиллярной крови;
• обработка биологической жидкости с помощью пропидия йодида, который связывается только с ДНК лейкоцитов (тромбоциты и эритроциты не имеют ядер);
• помещение чипа в аппарат;
• прибор фокусируется на флуорисцентном свечении, производится запись и подсчет клеток, выводится их изображение.

Метод высокоинформативен, так как дает точные результаты. Врач может просматривать изображение клетки в реальном времени.

Подсчет лейкоцитов в мазке

Для методики подсчета лейкоцитов в мазке необходима свежая капиллярная кровь. Её намазывают на предметное стекло сразу после забора биоматериала. Далее производят окрашивание по Романовскому-Гимзе. С помощью метода все клетки фиксируются и прокрашиваются, дальнейшие реакции не происходят.

Подсчет количества лейкоцитов на покровных стеклах осуществляется с помощью микроскопа. Наносят иммерсионное масло, чтобы все клетки лучше просматривались. Микроскоп переводят на иммерсионный объектив.

Клетки в образце располагаются неравномерно:

• по периферии - моноциты и гранулоциты;
• по центру - лимфоциты.

Микроскоп перемещают слева направо, вниз, справа налево. Мазок подсчитывают до тех пор, пока общее количество клеток не достигнет 100 единиц. Данные по каждому виду лейкоцитов заносят на бланк исследования.

Подсчёт лейкоцитов в моче

Осуществляют исследование форменных элементов и других образований в моче с помощью метода подсчета лейкоцитов по Нечипоренко. Для этого биологическую жидкость помещают в пробирку, центрифугируют. С помощью этого метода все образования выпадают в осадок. Его отбирают, переносят в счетную камеру.

Лейкоцитарная формула - важнейшее исследование, которое позволяет выявить реактивность организма в ответ на попадание инфекционного агента. Болезнь может протекать в скрытой форме, ее можно заподозрить в процессе подсчета белых кровяных телец. Исследование крови позволяет выявить состояние иммунитета, появление воспалительных процессов во внутренних органах. Определение лейкоцитов в моче выявляет нарушения в мочевыделительной системе.

Екатерина Беликова, врач лабораторной диагностики, специально для сайт

Полезное видео

Оснащение : средства индивидуальной защиты, исследуемый материал материал, лоток, микроскоп, камера Горяева, пастеровские пипетки, штатив с пробиркой, дозаторы с наконечниками, салфетки, контейнеры с дез.растворами.

Реактив : раствор 3% уксусной кислоты.

Алгоритм действий:

1. Вымыть и осушить руки, надеть перчатки.

2. Отмерить в сухую чистую пробирку 0,4 мл 3% уксусной кислоты.

3. Отмерить 0,02 мл цельной крови и протереть поверхность наконечника салфеткой.

4. Внести в опытную пробирку с 3% уксусной кислотой 0,02 мл цельной крови.

5. Перемешать содержимое пробирки и оставить стоять до момента счета (5 мин).

6. Подготовить камеру Горяева для подсчета лейкоцитов.

7. Перемешать перед заполнением камеры содержимое пробирки еще раз.

8. Нанести каплю разведенной крови пастеровской пипеткой на среднюю пластинку камеры у края покровного стекла.

9. Положить камеру на предметный столик на 1-2 мин, пока движение жидкости в ней не прекратится, и эритроциты не осядут. Включить микроскоп.

11. Произвести расчет лейкоцитов по формуле в 1 л крови и записать в бланк.

X= (a x 20)/(100 x b)

где X -- число лейкоцитов в 1 мкл крови; а - число посчитанных лейкоцитов; b - объем одного большого квадрата 1/250 мм3;

20 - разведение крови;

100 - число больших квадратов, в которых производился счет.

Конечная формула

X = a x 50 x 106 (в 1 Л)

12. Оценить полученные результаты с позиции «норма-патология».

13. Убрать рабочее место.

Норма-патология:

Эритроциты - норма

Лейкоциты - норма

458 - эритроциты

137 - лейкоциты

137*50*106 = 6850*106 = 6,85х103/мкл= 6,85х109/Л

Х=4,58х1012/Л

Гематология

4) Класс пролифирических клеток. Это морфологически распознаваемые клетки. Так как по морфологии отличается от предыдущих 3 классов. Имеют крупное рыхлое ядро с двумя - четырьмя ядрышкам, цитоплазма базофильна

В отличии от предыдущих клеток, бласт

5) класс созревающих клеток, характерных для своего ряда кроветворения

Здесь может быть несколько разновидностей клеток от одной до 5 в эритроцитарном ряду

6) класс зрелых клеток

Они функционируют в периферической крови, или за пределами сосудистого русла?

Название каждой клетки

Гематология

Анемии (малокровие) - представляют собой обширную группу патологических состояний и заболеваний, для которых общим признаков является снижение способности крови переносить кислород.

Анемия - группа заболеваний, общим моментом для которых является снижение концентрации гемоглобина в крови, реже при одновременном уменьшении числа эритроцитов (эритропения).

Классификация анемий:

6. По механизму развития:

1. Анемии вследствие кровопотерь.

2. Анемии вследствие усиленного кроворазрушения (гемолитические).

3. Анемии вследствие нарушенного кровообразования.

7. По типу кроветворения

1. Нормобластическое

2. Мегалобластичечкие

8. По цветовому показателю:

1. Нормохромные, когда цветовой показатель равен 0,82-1,05

2. Гипохромные, если цветовой показатель меньше 0,82

3. Гиперхромные, когда цветовой показатель выше 1,05

9. По размеру эритроцитов:

1. Нормоцитарные (с нормальным средним диаметром эритроцитов 7,2 - 8,0 мкм)

2. Микроцитарные (средний диаметр эритроцитов ниже 7,2 мкм)

3. Макроцитарные (диаметр эритроцитов более 8 мкм)

4. Мегалоцитарные (диаметр эритроцитов более 10 мкм)

5. По регенераторной активности костного мозга:

1. Регенераторные, с достаточной функцией костного мозга. Число Ретикулоцитов в периферической крови 1,0 -5,0%

2. Гипорегенераторные, с пониженной регенераторной функцией костного мозга. Количество Ретикулоцитов в периферической крови 0,2%

3. Гиперрегенераторные, с повышенной регенервторной функцией костного мозга. Количество Ретикулоцитов в периферической крови превышает 5,0%

4. Арегенераторные, с резким угнетением эритропоэза. Ретикулоциты в переферической крови, как правило, не определяются

Микроциты - преобладание в мазках крови эритроцитов с диаметром 5-6,5 мкм - наблюдают при наследственном сфероцитозе, железодефицитной анемии, таласемии. Все эти клетки имеют уменьшенный объем и меньше количество Hb. В основе изменений размеров эритроцитов лежит нарушение синтеза Hb.

Макроцитоз - преобладание в мазках крови эритроцитов диаметром более 9 мкм - выявляют при макроцитарных анемиях.

Мегалоцитоз - появляется в мазках крови эритроцитов диаметром 11-12 мкм, гиперхромных, без просветления в центре, овальной формы.

Анизоцитоз - присутствие в мазках крови эритроцитов, различающихся по размеру: с преобладанием эритроцитов малого диаметра - микроанизацитоз, с преобладанием эритроцитов большого диаметра - макроанизоцитоз.

Появляется на ранних стадиях анемии и является диагностическим признаком

Пойкилоцитоз - изменения различной степени выраженности формы эритроцитов, которая становится отличной от дисковидной. Это важнейший признак патологического изменения эритроцитов

Изменение окраски

Гематология - практика

Подсчет лейкоцитов в камере Горяева – это один из способов определения их количества в крови пациента. Число лейкоцитов зависит от множества факторов, к которым следует отнести скорость образования, выделение из костного мозга, уничтожение. На все перечисленные процессы оказывают непосредственное влияние физиологические факторы. Поэтому постоянная смена числа лейкоцитов у здорового человека возможна. Особенно это видно, если сравнивать результаты утренних и вечерних анализов.

Методика подсчета лейкоцитов в камере Горяева

Данный пробирочный метод состоит из следующих этапов:

1. Пробирка заполняется уксусной кислотой с тиазиновым красителем на 0,4 мл. С помощью капиллярной пипетки берется 20 мкл свежей крови и выдувается в эту же пробирку. Полученная смесь тщательно смешивается.
2. Тонкая стеклянная пластинка, находящаяся в камере, тщательно вытирается, после чего образуются радужные разводы.
3. Далее берется капля полученного раствора из крови с уксусной кислотой и подносится к краю пластинки.
4. Когда камера будет заполнена, ее не беспокоят в течение одной минуты, чтобы белые клетки крови начали оседать.
5. При малом увеличении производится подсчет лейкоцитов.

Чтобы получить верные результаты, используют специальную формулу для подсчета количества лейкоцитов в 1 мкл крови. Нормой считается показатель от 4 до 9 на 10 л.

Если получился результат, превышающий данную отметку, то пациенту ставится диагноз - лейкоцитоз. Если наблюдается снижение – лейкопения. Но это в теории, на деле нужно смотреть и на другие показатели, чтобы точно определить заболевание.

Для подсчета лейкоцитов используют три вида формул:

• Для 64 пустых квадратов

N = m x 4000 x 20/(64 x 16) = m x 78.13 ≈ m x 78

• Для 169 пустых квадратов

N = m x 4000 x 20 / (169 x 16) ≈ m x 29.6

• Для 100 пустых квадратов

N = m x 4000 x 20 / (100 x 16) ≈ m x 50.

Камера Горяева – это прибор, который может наиболее точно подсчитать число лейкоцитов, а также других подобных частиц. В ее состав входит специальное толстое стекло с прямоугольной камерой. На ней расположена микроскопическая сетка и тоненькое оптическое стекло.

Этот аппарат разрабатывал известный профессор Горяев Николай Константинович, который трудился в Казанском университете. Его специфическая сетка давала наиболее точные результаты, чем камеры других известных ученых.

Что касается обслуживания камеры, то здесь тоже существуют свои нюансы. В перерывах от работы камера Горяева должна находиться в сухой зоне. Когда работа завершена, ее нужно обработать. Для этого аппарат погружают в этиловый спирт (70%) на полчаса. Другой вариант очистки – это раствор формалина (4%) на один час. Завершающим этапом становится промывка камеры Горяева дистиллированной водой и протирка мягкой тканью.

Существуют случаи, когда при низких показателях в организме пациента все в порядке. Это говорит о том, что основной резерв лейкоцитов находится в тканях. У таких людей предрасположенность к различным заболеваниям очень низка, поэтому они редко болеют. В основном это наследственность.

Лейкопения и лейкоцитоз

Предположить, что у пациента диагноз лейкопения, можно также с помощью камеры Горяева. Ее делят на органическую и функциональную.

К функциональным отклонениям относят:

• заболевания, носящие вирусную или бактериальную этиологию (кишечные инфекции, гепатит А и другое);
• реакция на некоторые медикаменты;
• при сильной нагрузке на мышцы, стрессы, диеты;
• при неправильном хранении крови.

К органическим причинам можно отнести:

• панмиелофтиз;
• лейкоз;
• болезнь Ходжкина;
• ревматическая болезнь;
• облучение ионами;
• агранулоцитоз.

Лейкоцитозом организм отвечает в том случае, когда на него оказывают влияние эндогенные и экзогенные факторы. На практике выделяют физиологическую, а также патологическую формы болезней.

К физиологическим причинам можно отнести:

• переваривание пищи – в этот период значение лейкоцитов резко растет, но через три часа все приходит в норму;
• стресс, нервы, физический труд, переохлаждение или перегрев, беременность с третьего месяца, менструация.

К патологическим причинам относят:

• рак крови;
• попадание в организм некоторых инфекций, а также воспаление (сепсис);
• радиация, отравления организма различными ядами, в том числе насекомых;
• действие некоторых лекарственных препаратов (нейромедиаторы, биогенный амин, стероидные гормоны и другое);
• некроз тканей, серьезные болезни сердца, гангрены, почечная кома;
• обильные кровотечения (получение серьезных ран, операции в гинекологии и так далее).

Чтобы не запускать болезнь, необходимо регулярно посещать плановые осмотры и сдавать необходимые анализы. Упущенное время способно погубить здоровье или забрать драгоценную жизнь.

Количество лейкоцитов в крови зависит как от скорости их образования, так и от мобилизации их из костного мозга, а также от их утилизации и миграции в ткани (в очаги повреждения), захвата легкими и селезенкой. На эти процессы, в свою очередь, влияет ряд физиологических факторов, и поэтому число лейкоцитов в крови здорового человека подвержено колебаниям: оно повышается к концу дня, при физической нагрузке, эмоциональном напряжении, приеме белковой пищи, резкой смене температуры окружающей среды.

Количественное определение лейкоцитов

Лейкоциты подсчитываются с использованием камеры Горяева и с помощью автоматических счетчиков.

Подсчет лейкоцитов с помощью камеры Горяева

При пробирочном методе взятия крови для подсчета лейкоцитов:

• в пробирку наливают 0,4 мл раствора 3–5% уксусной кислоты, подкрашенной метиленовой синью. Капиллярной пипеткой набирают из свежей капли 20 мкл крови (разведение в 20 раз), осторожно выдувают ее в пробирку с реактивом и ополаскивают пипетку. Смесь хорошо перемешивают;
• чистое и сухое покровное стекло притирают к камере так, чтобы в месте соприкосновения образовались радужные кольца;
• кровь, разведенную в пробирке, хорошо перемешивают. Концом круглой стеклянной палочки отбирают каплю крови и подносят к краю шлифованного стекла камеры;
• после заполнения камеры ее оставляют на 1 мин в покое для оседания лейкоцитов;
• считают лейкоциты при малом увеличении (объектив ×8 или ×9, окуляр ×10 или ×15) при затемненном поле зрения (при опущенном конденсоре или суженной диафрагме);
• для получения удовлетворительных результатов подсчитывают лейкоциты в 100 больших квадратах.

Зная объем большого квадрата и степень разведения крови, находят количество лейкоцитов в 1 мкл и 1 л крови. Сторона большого квадрата равна 1/5 мм, площадь - 1/25 мм2, объем пространства над этим квадратом - 1/250 мм3.

Формула для подсчета лейкоцитов:

где В - количество лейкоцитов в 100 больших квадратах;
П - степень разведения (20).

Количественное содержание лейкоцитов

Норма: 4,0–9,0 × 10 9 /Л

Увеличение количества лейкоцитов выше 9,0 × 10 9 /л называется
лейкоцитозом, уменьшение их числа ниже 4,0 × 10 9 /л - лейкопенией. Однако даже 3,5 × 10 9 в 1 л лейкоцитов для ряда лиц может являться нормой. По данным литературы, у таких людей повышена иммунная сопротивляемость и они реже болеют, что, по-видимому, объясняется необходимостью для осуществления иммунных реакций наличия резерва лейкоцитов в тканях, где их в 50–60 раз больше, чем в кровяном русле. Очевидно, именно у здоровых лиц с низким содержанием лейкоцитов в периферической крови соответственно увеличены резервы их в тканях. Объясняют этот феномен наследственно-семейным характером или повышением влияния парасимпатической нервной системы.

Лейкопения может быть функциональной и органической.
Функциональная лейкопения связана с нарушением регуляции кроветворения и наблюдается:

• при некоторых бактериальных и вирусных инфекциях (брюшной тиф, грипп, оспа, краснуха, болезнь Боткина, корь);
• при действии лекарственных препаратов (сульфаниламидов, анальгетиков, противосудорожных, антитиреоидных, цитостатических и других препаратов);
• при мышечной работе, введении чужеродного белка, нервных и температурных влияниях, голодании, гипотонических состояниях;
• ложная лейкоцитопения может быть связана с агрегацией лейкоцитов во время длительного хранения крови при комнатной температуре (более 4 ч).

Органическая лейкопения, возникающая в результате аплазии костного мозга и замещения его жировой тканью, бывает при:

• апластической анемии;
• агранулоцитозе;
• лейкопенической форме лейкоза;
• некоторых формах лимфогранулематоза;
• ионизирующем облучении;
• гиперспленизме (первичном и вторичном);
• коллагенозах.

Лейкоцитоз

Лейкоцитоз - это реакция кроветворной системы на воздействие
экзогенных и эндогенных факторов. Различают физиологический и патологический лейкоцитоз.

Физиологический лейкоцитоз бывает:

• пищеварительный - после приема пищи, в особенности богатой белками; число лейкоцитов не превышает 10,0–12,0 × 10 9 /л и через 3–4 часа возвращается к норме;
• при эмоциональном напряжении (выделение адреналина), тяжелой физической нагрузке, охлаждении, чрезмерном пребывании на солнце (солнечные ожоги), введении ряда гормонов (катехоламинов, глюкокортикостероидов и др.), во второй половине беременности, во время менструаций и обусловлен неравномерным распределением лейкоцитов в кровяном русле.

Патологический лейкоцитоз делится на абсолютный и относительный.

Абсолютный лейкоцитоз - повышение числа лейкоцитов в крови до нескольких сотен тысяч (100,0–600,0 × 10 9 /л и более).

• Наиболее часто наблюдается при лейкозах: при хроническом лейкозе - в 98–100 % случаев, при острых лейкозах - в 50–60 %. Изменение соотношения клеток лейкоцитарного ряда в пунктате костного мозга и в крови служит основой диагностики лейкозов.

Относительный лейкоцитоз наблюдается:

• при острых воспалительных и инфекционных процессах, исключение составляют брюшной тиф, грипп, оспа, краснуха, бо лезнь Боткина, корь. Наибольший лейкоцитоз (до 70,0–80,0 × 10 9 /л) отмечается при сепсисе;
• под влиянием токсических веществ (ядов насекомых, эндотоксинов), ионизирующей радиации (сразу после облучения);
• в результате действия кортикостероидов, адреналина, гистамина, ацетилхолина, препаратов наперстянки;
• при распаде ткани (некрозе), инфаркте миокарда, тромбозе периферических артерий с развитием гангрены, ожогах, экссудативном плеврите, перикардите, уремии, печеночной коме;
• значительных кровопотерях при ранениях, внутренних, гинекологических и других кровотечениях.

Повышение числа лейкоцитов при инфекционных заболеваниях в большинстве случаев сопровождается сдвигом лейкоцитарной формулы влево